Etude d'une protéine à pied d'ancrage : la phosphatase alcaline osseuse : isolement, caractérisation, interactions membranaires et rôle dans les processus de minéralisation

par Corinne Bourrat

Thèse de doctorat en Sciences

Sous la direction de Gérard Azzar.

Soutenue en 1998

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Gérard Azzar.


  • Résumé

    La phosphatase alcaline (pal ; ec 3. 1. 3. 1) existe sous quatre isoformes exprimees dans differents tissus chez les organismes superieurs. La forme rencontree dans les cellules osseuses est une forme dite tissu non-specifique, elle provient d'un gene porte par le chromosome 1 qui s'exprime egalement dans le foie ou dans les reins. Il s'agit essentiellement d'une proteine associee aux membranes plasmiques par l'intermediaire d'un motif glycosyl phosphatidylinositol (ancrage gpi). Nous avons etudie trois types de pal osseuses : celle du femur de veau, celle du femur d'embryon de poulet et celle d'osteoblastes humains en culture. Apres avoir extrait ces pal osseuses par differents types de detergents (non-ioniques, anionique ou zwitterionique), nous avons purifie ces enzymes par des techniques de chromatographie (filtration sur gel, hydrophobe, affinite et immunoaffinite). Dans le cas de la pal des osteoblastes humains, la solubilisation par le n-octyl -d-glucopyranoside entraine un processus d'activation pouvant aller jusqu'a deux et ceci en fonction de l'age des donneurs. Nous avons egalement etudie l'influence de certains lipides sur l'activite de la pal osseuse. La pal osseuse peut favoriser les processus de mineralisation, nous avons essaye de reconstituer in vitro des milieux de mineralisation et de voir l'influence de la pal et du motif gpi sur ce processus. Nous avons enfin essaye de reinserer la pal avec motif gpi dans des liposomes, systeme qui pourrait etre utilise pour reproduire un processus de mineralisation in vitro. En conclusion, cette enzyme est extraite preferentiellement par des detergents non-ioniques. L'activite de cette proteine a gpi peut etre affectee par certains lipides, cette induction variant selon le type de pal osseuse utilisee. L'etude de la formation de phosphates mineraux a partir de pal purifiee dans un milieu reconstitue in vitro produit des cristaux d'hydroxyapatite et de brushite. La pal osseuse peut etre incorporee dans des structures membranaires de type liposome.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (183 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 161-178

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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