Caractérisation biochimique de la phosphatase alcaline à ancre GPI et reconstitutions membranaires

par Olivier Nosjean

Thèse de doctorat en Sciences

Sous la direction de Bernard Roux.

Soutenue en 1998

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Bernard Roux.


  • Résumé

    Les membranes biologiques sont constituees de phospholipides et de proteines inserees, ainsi que de nombreux autres lipoconjugues. L'existence de domaines membranaires enrichis en cholesterol, en glycosphingolipides et en proteines a ancre membranaire de type glycosyl phosphatidylinositol (gpi), est une hypothese tres debattue dans la litterature actuelle. Notre approche de reconstitution de membranes a partir de ces composes permet de participer a ce debat en utilisant un modele de composition connue. En preambule au travail de reconstitution proprement-dit, nous caracterisons la phosphatase alcaline, une enzyme a motif gpi preparee a partir de differents organes animaux ou humains. En particulier, nous mettons en evidence une heterogeneite de structure de l'enzyme au niveau du motif gpi le long de l'intestin de boeuf, et au niveau de glycosylations de la chaine peptidique le long de l'intestin de porc. Par ailleurs, les glycosylations de la phosphatase alcaline humaine de rein, de foie et d'os, jouent un role important pour son activite enzymatique. La phosphatase alcaline de rein de boeuf est purifiee et est utilisee pour la preparation de reconstitutions membranaires comportant egalement du cholesterol et du lactocerebroside. Nos resultats montrent que la phosphatase alcaline est inseree a 100% dans le feuillet externe de la bicouche et qu'elle est accessible a une hydrolase du motif gpi. Nous mettons egalement en evidence la formation d'un precipite important lors de la solubilisation de liposomes comportant la proteine a gpi et du cholesterol. Ce precipite constitue un bon modele pour l'etude des complexes membranaires decrits dans la litterature et prepares a partir de membranes biologiques par precipitation en presence de detergent. Par l'utilisation d'une methode originale, nous montrons par ailleurs que les liposomes encapsulent tres efficacement les ions magnesium, qui ne diffusent a travers la membrane qu'apres ajout de detergent.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (146 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 123-141

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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