Greffage covalent de peptides sur supports polymères fonctionnalisés : application à la détection immunodiagnostique de maladies infectieuses graves

par Eric Tournier

Thèse de doctorat en Sciences. Génie biologique et médical

Sous la direction de Jean Wallach.

Soutenue en 1998

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Jean Wallach.


  • Résumé

    Ce travail, realise en collaboration avec la societe indicia diagnostics, a mis au point une nouvelle strategie de greffage covalent d'antigenes sur particules de latex pour le developpement de tests de depistage par agglutination immunologique. L'hypothese, simplement posee dans la litterature, selon laquelle l'alkylation d'un groupe thiol par le maleimide du s-smcc suit un ordre deux, a ete demontree. La reaction, rapide malgre les faibles quantites de produits mises en jeu, se produit par l'intermediaire des anions rs. Lors de la reaction entre une amine et l'ester actif du s-smcc, l'hydrolyse est la principale reaction parasite. Elle depend fortement du ph et il a ete demontre qu'elle est du premier ordre en oh uniquement au-dela de ph = 8. En milieu totalement aqueux, la reaction des amines avec l'ester actif du s-smcc se deroule par l'intermediaire de molecules non-protonees. Sur latex carboxyles actives par carbodiimide et s-nhs, la reaction entre esters actifs et fonctions amines est quasi totale dans des conditions stoechiometriques. Pour les latex amines, la faible vitesse de reaction entre les amines du support et s-smcc a ete attribuee a une acidification locale et a l'etablissement d'un regime de diffusion. Deux schemas de fixation covalente d'un peptide sur un support ont ete proposes. La reactivite immunologique de particules de latex a ete etudiee apres immobilisation covalente par s-smcc de peptides caracteristiques de l'infection par le virus htlv. L'agglutination mesuree est specifique de la presence d'igg anti-htlv dans le serum teste. La comparaison de lots de particules portant le meme peptide immobilise par des techniques differentes a permis de prouver sans ambiguite qu'un bras espaceur et un faible greffage permettent de s'affranchir de la gene sterique. La mesure du potentiel z de particules modifiees a montre le role important des charges electriques de surface sur l'agglutination. La reaction d'agglutination a ete optimisee en modifiant le ph et la force ionique du tampon. Un test immunologique de depistage a ete developpe et evalue avec plusieurs serums de la societe francaise de transfusion. Le spherotest htlv est le plus sensible et le plus efficace des cinq tests compares.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (139 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 125-139

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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