Influence de la pression, de la temperature et des additifs solubles sur l'activite et la stabilite conformationnelle des enzymes

par VIOLAINE ATHES

Thèse de doctorat en Biologie et génétique moléculaires et cellulaires. Biotechnologie

Sous la direction de DIDIER COMBES.

Soutenue en 1998

à Toulouse, INSA .

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  • Résumé

    L'effet des hautes pressions hydrostatiques et de la temperature sur la stabilite de deux enzymes a ete etudie. Les enzymes employees sont la beta-galactosidase de kluyveromyces lactis (200 kda) et l'invertase de saccharomyces cerevisiae (270 kda) ; toutes deux sont dimeriques et glycosylees. Le fait que la pression et la temperature perturbent l'activite enzymatique et/ou la conformation des proteines a permis de mieux apprehender les forces qui gouvernent la stabilite structurale et fonctionnelle des enzymes. La pression, comme la temperature, conduisent a l'inactivation irreversible des deux enzymes etudiees, mais avec des stabilites thermique ou hyperbare differentes pour chacune. Le suivi de l'activite est accompagne d'observations concernant les modifications conformationnelles, realisees grace a deux methodes : la fluorescence et la spectroscopie raman. Alors que les effets respectifs de la temperature et de la pression semblent similaires quant a l'inactivation irreversible des enzymes, les modifications conformationnelles induites par la temperature ou par la pression sont de nature differente. Parallelement a l'etude des mecanismes de denaturation, nous avons mene des essais de stabilisation en conditions thermiques ou hyperbares, afin d'utiliser les enzymes dans des procedes fonctionnant dans des conditions extremes. La stabilite thermique des enzymes peut etre amelioree par l'application de pressions moderees et/ou grace a l'utilisation d'additifs solubles. L'ajout de sels ou de polyols a la solution enzymatique se revele un moyen simple et, essentiellement dans le cas des polyols, tres efficace pour ameliorer egalement la stabilite hyperbare des enzymes.


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Informations

  • Détails : 174 P.
  • Annexes : 232 REF.

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1998/485/ATH
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