Etude de la regulation de la proteine multifonctionnelle ura2 chez saccharomyces cerevisiae

par RICHARD ANTONELLI

Thèse de doctorat en Génétique et biophysicochimie moléculaires et cellulaires - Biotechnologies

Sous la direction de MICHELE DENIS DUPHIL.

Soutenue en 1998

à Toulouse, INSA .

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  • Résumé

    La synthese des pyrimidines est presente dans la quasi totalite des organismes vivants. La levure saccharomyces cerevisiae constitue un bon modele pour l'etude de la regulation de cette voie. Le gene ura2 code une proteine multifonctionnelle qui intervient au cours des deux premieres etapes de la biosynthese de l'uridinemonophosphate (ump). Cette proteine porte les activites enzymatiques carbamylphosphatesynthetase (cpsase) et aspartatetranscarbamylase (atcase) qui sont primordiales dans la regulation de la synthese de novo des pyrimidines. Dans un premier temps, nous nous sommes particulierement interesses a la phosphorylation du pont peptidique en amont du domaine atcase. Par mutagenese dirigee sur le site de phosphorylation de la proteine kinase dependante de l'amp cyclique (pka), nous avons pu montrer que la phosphorylation de ce site ne change pas la regulation des activites cpsase et atcase. Par une technique originale de pcr inverse, nous avons supprime sequentiellement differents domaines de la proteine. L'etude de ces mutants de deletion nous a permis de montrer que l'inhibition par l'uridinetriphosphate (utp) des deux activites (atcase et cpsase) est due a l'interaction des deux domaines catalytiques. Sans interaction, l'inhibition de la cpsase est partielle et celle de l'atcase n'est plus possible. De plus le seul site de fixation de l'utp present a la fin du domaine cpsase est requis pour l'inhibition des deux activites. Enfin, nous avons observe une localisation cytoplasmique de la proteine multifonctionnelle ura2 en utilisant une fusion avec une proteine rapporteur : la green fluorescent protein (gfp).


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Informations

  • Détails : 140 P.
  • Annexes : 105 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1998/472/ANT
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