Localisation subcellulaire et inactivation catalytique de l'acc oxydase de fruits

par Sabine Ramassamy

Thèse de doctorat en Biologie moléculaire et cellulaire végétale

Sous la direction de Alain Latché.

Soutenue en 1998

à Toulouse, INPT .


  • Résumé

    L'ethylene est une hormone vegetale qui joue un role determinant dans l'initiation et le controle de la maturation des fruits climacteriques. La derniere etape de sa voie de biosynthese est catalysee par une enzyme cle, l'aminocyclopropane-1-carboxylate (acc) oxydase. Dans le present travail, grace a des techniques telles que l'efflux de macromolecules extracellulaires et le fractionnement cellulaire associees a la detection par western blot et l'immunocytolocalisation appliquee a des protoplastes entiers, il est demontre que l'acc oxydase est localisee sur la face externe de la membrane plasmique des cellules de pomme. L'analyse par western blot de l'acc oxydase de pomme et de l'acc oxydase de tomate produite dans des levures, separees par focalisation isoelectrique, a permis de reveler une modification du pi de ces proteines en relation avec leur inactivation catalytique. Une etude plus fine de ce phenomene a ete entreprise sur une acc oxydase recombinante pure surproduite dans e. Coli. Les peptides issus de la digestion par l'endoprotease lys c de la proteine recombinante active et inactivee ont ete separes par hplc. La comparaison des profils d'elution obtenus fait apparaitre d'importantes modifications des temps de retention de certains peptides. L'analyse de la masse en maldi-tof d'un de ces peptides met en evidence un gain de masse de 15. L'hypothese d'une modification de l'acc oxydase par des phenomenes d'oxydations catalyses par les metaux est discutee. L'etude en resonnance paramagnetique electronique (rpe) de l'acc oxydase complexee avec le cuivre a mis en evidence deux centres de liaison a ce metal au sein de la proteine. La disparition du spectre rpe relatif a l'un de ces centres lors de l'ajout des substrats et autres cofacteurs de l'enzyme a permis de suggerer l'implication d'un seul de ces centres dans le site actif de l'enzyme.

  • Titre traduit

    Subcellular localization and catalytic inactivation of acc oxidase from fruits


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Informations

  • Détails : 105 f.
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. f. 92-105

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  • Bibliothèque : Ecole nationale supérieure agronomique. Centre de documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1998INPT009A
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