Etude d'un mecanisme de demethylation active de l'adn : purification et caracterisation d'une 5-methylcytosine-adn glycosylase

par Marc Frémont

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de CLAUDE GAILLARDIN.

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  • Résumé

    Nous avons purifie a partir d'embryons de poulets de 12 jours une enzyme impliquee dans un mecanisme de demethylation active de l'adn : une 5-methylcytosine-adn glycosylase. Cette activite necessite a la fois une proteine et un arn. Le composant arn a ete clone et sequence. Treize sequences differentes ont ete obtenues. Elles sont inconnues dans les bases de donnees et ne presentent pas d'homologies entre elles. Elles sont toutes tres riches en dinucleotides cpg. Des hybridations northern blot montrent que ces sequences sont des fragments degrades de precurseurs pouvant atteindre plusieurs kb. Des oligoribonucleotides synthetiques peuvent restaurer l'activite de l'enzyme traitee a la ribonuclease s'ils presentent un minimum de quatre bases complementaires de la sequence a demethyler. Le role de l'arn semble donc etre de diriger l'enzyme sur le site a demethyler. L'expression de l'un des clones a ete etudiee par hybridation in situ sur des coupes d'embryon de poulet. L'expression est tres forte dans les tissus ou les cellules se divisent activement, ce qui suggere une relation entre demethylation et replication. Tous les arns peuvent former des structures secondaires tres complexes. Ces structures pourraient conferer aux arns une deuxieme fonction : l'inhibition de la methyltransferase au niveau des sites de replication.


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Informations

  • Détails : 255 p.
  • Annexes : 289 ref.

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