Apport des approches in situ pour l'analyse du phenomene d'inactivation du chromosome x chez les mammiferes

par FABIEN MONGELARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MICHEL ROBERT NICOUD.

Soutenue en 1998

à Grenoble 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    L'inactivation du chromosome x chez les mammiferes femelles est la mise sous silence transcriptionel d'un des deux chromosomes x. L'organisation de la chromatine du chromosome inactif (xi) est differente de celle de son homologue actif (xa) ; la nature de cette difference est inconnue. Une region contenant le gene xist (x inactive specific transcript) est indispensable au phenomene. Le travail presente ici vise a apporter de nouvelles informations a la fois sur l'organisation de la chromatine des chromosomes actifs et inactifs, et sur la fonction du gene xist. L'analyse de la structure chromatinienne des chromosome x a ete realisee en combinant l'hybridation in situ fluorescente (fish) a la microscopie confocale a balayage laser. Nous avons developpe des outils et des methodes pour evaluer la qualite des protocoles de fish, et pour ameliorer et analyser les images microscopiques numeriques. Des precautions particulieres doivent etre prises pour la quantification des resultats de fish. Dans des noyaux de fibroblastes humains feminins, les deux chromosomes x ont un volume identique mais different par la texture du marquage par fish. Des differences se retrouvent aussi au niveau du centromere. La detection in situ du transcrit xist permet la definition d'une region minimale comprenant xist, capable d'entrainer l'inactivation lors d'experiences de transgenese. L'integration en copie unique d'un transgene contenant xist, contrairement a une integration multiple, est incapable de declencher l'inactivation dans des cellules souches embryonnaires (es) differenciees murines, suggerant que des sequences essentielles a une fonction autonome de la region sont absentes, et indiquant l'existence de facettes insoupconnees du phenomene d'inactivation. Des cellules es de souris transgeniques porteuses de la region contenant le xist humain ont ete etudiees. Une courbure du chromosome cible, est induite au niveau du site d'integration ; la signification de cette courbure est incomprise.

  • Titre traduit

    Study of the mammalian x-chromosome inactivation phenomenon using functional and structural in situ approaches


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  • Détails : 202 P.
  • Annexes : 248 REF.

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