Caracterisation d'ultraspiracle, partenaire du recepteur a l'ecdysone et son expression au cours de la metamorphose de tenebrio molitor (insecte, coleoptere)

par MARYSE NICOLAI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean Delachambre.

Soutenue en 1998

à Dijon .

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  • Résumé

    La vie des insectes est regulee principalement par deux hormones : les ecdysteroides (20-hydroxyecdysone, 20e) et les juveniles hormones (jh). Ultraspiracle, le partenaire qui forme l'heterodimere fonctionnel du recepteur aux ecdysteroides, n'est pas connu chez tenebrio. Le but de ce travail a ete alors de cloner usp et d'etudier son expression et sa regulation au cours de la metmorphose de tenebrio molitor. A partir de la region la plus conservee chez les recepteurs nucleaires, des amorces hautement degenerees ont ete designees pour realiser une rt-pcr. Un fragment de 125 pb a ete obtenu et une race-pcr a ete effectuee avec des amorces specifiques deduites de ce fragment. Un fragment de 780 pb a ete obtenu et utilise pour cribler une banque d'adnc epidermique de tenebrio. L'adnc complet de tmusp a ete obtenu et la comparaison de sa sequence deduite en acides amines montre une forte identite avec celle de plusieurs usp de differents insectes deja connus. Apres criblage d'une banque genomique en utilisant cet adnc comme sonde, l'analyse de tmusp a montre la presence de plusieurs introns. L'expression de tmusp (anrm de 2,5 kb) dans l'epiderme de tenebrio durant la metamorphose a ete etudiee et une correlation entre la quantite de transcrit et le taux de 20e a ete observee. Un traitement mimant le pic nymphal de 20e ne modifie pas l'expression de tmusp. Il en est de meme apres traitement par un analogue de la jh. L'analyse par western blot d'extraits totaux de proteines epidermiques en utilisant un anticorps anti-usp montre cinq bandes. Un traitement phosphatasique a montre que ces cinq bandes correspondaient a differentes formes phosphorylees d'un seul polypeptide. Seule la forme non phosphorylee est detectee dans l'extrait nucleaire. Un traitement par la 20e in vivo augmente considerablement et rapidement la phosphorylation de tmusp. La phosphorylation joue donc probablement un role important dans la reponse a la 20e.


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  • Détails : 104 P.
  • Annexes : 268 REF.

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