Caractérisation de protéines extracellulaires reliées aux phases précoces de l'embryogenèse somatique d'un Cichorium hybride : Analyses immunocytologique et moléculaire de l'implication de R-1,3-glucanases accumulées au cours du processus embryogène.

par Stéphane Helleboid

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Jean-Louis Hilbert.

Soutenue en 1998

à Compiègne .


  • Résumé

    Notre étude des événements précoces associés à l'embryogenèse somatique (ES) du Cichorium hybride '474' (C. Intybus L. , var. Sativum x C. Endivia L. , var. Latifolia), a consisté à suivre les changements dans la teneur en polyamines et dans les profils protéiques des tissus au cours de ce processus. Le développement précoce des embryons somatiques est accompagné d'une augmentation de la teneur en polyamines et d'une accumulation de protéines extracellulaires dans le milieu de culture embryogène. L'adjonction d'a-difluorométhylarginine au milieu de culture diminue de façon drastique la teneur en polyamines et le nombre d'embryons. Ceci a suggéré que les polyamines pouvaient être associées à l'ES. Parallèlement, nous avons montré que les teneurs en protéines excrétées dans le milieu de culture du Cichorium hybride '474' étaient affectées, en particulier pour des protéines de 38 kDa homologues à des protéines tissulaires précédemment associées au processus d'ES. Afin d'élucider le rôle possible des protéines extracellulaires fortement accumulées clans le milieu de conditionnement embryogène, trois protéines majeures de 38 kDa, 32 kDa et 25 kDa ont été étudiées. L'emploi du microséquençage et de techniques immunologiques et enzymatiques nous a permis de caractériser des 0-1,3-glucanases de 38 kDa, des chitinases de 32 kDa et des 'osmotin-like' protéines de 25 kDa. L'accumulation de ces trois 'Pathogenesis-Related' (PR) protéines est corrélée avec le processus d'ES. L'utilisation de techniques d'immunolocalisation nous a permis de mettre en évidence une co-localisation de la callose et des B-1,3-glucanases de 38 kDa. C'est pourquoi, nous avons proposé que ces B-1,3-glucanases soient impliquées dans la dégradation de ce polymère de p-1,3-glucanes, la callose, au cours du développement des embryons somatiques. Par RT-PCR, trois cDNAs partiels (CG1, CG2 et CG3) correspondants à des B-1,3-glucanases ont été amplifiés et clonés. Un cDNA pleine longueur CG1 a été reconstitué par RACE-PCR. Les 3 cDNAs semblent correspondre aux protéines de 38 KDa précédemment étudiés, car leurs séquences déduites en acides aminés présentent des homologies importantes avec les séquences aes peptides issus du microséquençage des protéines de 38 kDa. D'autre part, l'analyse de l'expression des gènes correspondant à chacun des cDNAs a révélé que seul CG1 était corrélé au processus embryogène chez le Cichorium hybride '474'.

  • Titre traduit

    Characterisation of extracellular proteins associated to early steps of cichorium somatic embryogenesis : Immunocytochemical and molecular analyses of culture medium accumulated -1,3-glucanases implication during the embryogenic process


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  • Détails : 143 p.
  • Annexes : 251ref.

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