Effet de solvant sur la sélectivité de l'hydrolyse de l'hémoglobine bovine par la pepsine et sur l'obtention de peptides à activité biologique

par Brigitte Lignot

Thèse de doctorat en Génie Enzymatique, Bioconversion et Microbiologie

Sous la direction de Didier Guillochon.

Soutenue en 1998

à Compiègne .


  • Résumé

    Ce travail concerne l'étude de la sélectivité d'hydrolyse de la pepsine vis à vis de l'hémoglobine bovine prise comme protéine modèle. Nous avons montre qu'il était possible, en modifiant les conditions d'hydrolyse, d'altérer la sélectivité d'hydrolyse de la pepsine, en termes des peptides produits a un stade avance de la protéolyse. En effet, la nature des peptides produits à pH 4,5 différé de ceux observés à pH 2, ph optimal d'action de la pepsine. De même, la présence d'éthanol dans le milieu réactionnel induit une modification nette de la sélectivité en comparaison de l'hydrolyse en milieu purement aqueux. D'autre part, le suivi de l'évolution de la population peptidique au cours du temps, par HPLC de phase inverse, a révélé une altération du mécanisme d'hydrolyse dans les différents milieux. En milieu aqueux, l'hydrolyse procède selon un mécanisme du type one-by-one alors qu'elle procède selon un mécanisme du type « zipper » en milieu urée. Dans le milieu éthanol, le mécanisme d'hydrolyse est intermédiaire entre le « one-by-one » et le « zipper » car la présence d'éthanol induit une stabilisation des peptides intermédiaires. Cette étude cinétique a révélé par ailleurs que la différence de sélectivité observée lors de l'hydrolyse en présence d'éthanol provient d'un effet de solvant sur la cinétique d'hydrolyse et n'est, en aucun cas, révélatrice d'une altération de la reconnaissance des liaisons peptidiques par la pepsine. L'utilisation de solvant permet en général d'accumuler les peptides d'intérêt biologique ou biotechnologique (opioïdes ou amphiphiles) en quantité plus conséquente que lors d'une hydrolyse en milieu purement aqueux. Le mélange eau-éthanol constitue en outre un milieu réactionnel beaucoup plus intéressant d'un point de vue biotechnologique que les solutions d'urée car ce solvant est facilement évaporable et permet de récupérer les peptides avec un minimum de sels.

  • Titre traduit

    Solvent effect on the selectivity of pepsin-catalysed hydrolysis of bovine hemoglobin and on the generation of biologically active peptides


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Informations

  • Détails : 1 vol. (198 p.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 175 réf.

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  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1998 COMP LIG
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