Mise au point du dosage simultane de plusieurs antigenes en immunoanalyse avec detection electrochimique

par ANNE-LINE BORDES

Thèse de doctorat en Sciences médicales

Sous la direction de Chantal Degrand.

Soutenue en 1998

à Clermont-Ferrand 2 .

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  • Résumé

    L'un des objectifs majeurs en immunoanalyse est actuellement la mise au point de dosages simultanes. Aussi le but de ce travail a-t-il ete d'adapter une technique d'immunodosage electrochimique competitif homogene et sans etape de separation, a la detection simultanee de plusieurs haptenes (medicaments). Cette technique est basee sur l'utilisation d'un marqueur redox cationique et d'une electrode a pate de carbone impregnee de nafion comme capteur. Ce dernier est un polymere anionique perfluorosulfonate qui preconcentre selectivement les molecules cationiques hydrophobes. La detection electrochimique s'effectue par voltammetrie a vague carree. Nous avons marque deux antiepileptiques, a savoir la phenytoine et le phenobarbital, par un sel de ferroceneammonium, et un sel de cobalticinium, et un antidepresseur, la nortriptyline, par un complexe de ruthenium (ii). Le choix de ces trois marqueurs a ete guide par le fait que chacun possede un potentiel standard redox tres distinct. Nous avons verifie que les trois medicaments marques, c'est-a-dire les traceurs, peuvent s'accumuler simultanement. Apres obtention des courbes de calibration separees, puis simultanees des traceurs correspondant aux deux antiepileptiques, nous avons etudie divers parametres intervenant sur leur reponse electrochimique (serum, ethanol, molecule hydrophobe). Les courbes de titrage des antisera de la phenytoine et du phenobarbital ont permis de fixer leur dilution pour la suite de l'immunodosage. Enfin, les courbes de calibration separees puis simultanees des antiepileptiques ont ete obtenues, ce qui demontre pour la premiere fois que l'on peut detecter de maniere concomitante deux medicaments par une technique d'immunodosage avec detection electrochimique. La courbe de calibration de la nortriptyline marquee a pu etre obtenue, mais ce complexe s'est malheureusement revele tres instable en milieu serique. L'immunodosage competitif de la nortriptyline a l'aide du traceur synthetise n'est donc pas envisageable.

  • Titre traduit

    Set up of the simultaneous assay of several antigens in immunoanalysis with electrocheminal detection


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  • Détails : 122 P.
  • Annexes : 119 REF.

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