Etude des messagers de l'aromatase de lapin dans les cellules de granulosa en culture

par BENEDICTE DELARUE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Leymarie.

Soutenue en 1998

à Caen .

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  • Résumé

    La regulation de l'expression du gene de l'aromatase, enzyme qui transforme les androgenes en oestrogenes, est un domaine de recherche tres actuel en physiologie ovarienne car l'oestradiol exerce d'importantes fonctions regulatrices endocrines et paracrines. En vue d'evaluer ulterieurement l'action de regulateurs potentiels de l'expression du gene de l'aromatase dans l'ovaire de lapine, nous avons mis au point une methode de mesure ultrasensible par rt-pcr de ses arn messagers. Le gene de l'aromatase de lapin n'etant pas clone, son adnc a ete prealablement etudie par une methode race pcr : deux adnc de l'aromatase ont ainsi ete mis en evidence et sequences. Le premier, d'une longueur de 2,9 kb, code pour une proteine dont la structure primaire est plus proche de celle de l'aromatase humaine que celles qui avaient ete etudiees precedemment (nous l'appelons adnc actif). Le deuxieme, d'une longueur de 1,5 kb, code pour une proteine incapable d'aromatiser les androgenes (adnc inactif) car elle ne possede pas l'indispensable zone de fixation de l'heme remplacee par une sequence intronique. Le messager actif est exprime dans des cellules de granulosa, le placenta, le tissu adipeux et l'endometre mais il est absent de l'intestin et des surrenales ; cette distribution est semblable a celle decrite chez l'homme. L'etude de l'extremite 5' de l'adnc placentaire et ovarien a montre que le lapin, comme l'homme, utilise des promoteurs tissu specifique. Une methode de mesure par rt-pcr competitif des messagers de l'aromatase a ensuite ete validee au plan analytique et applique a ces cellules de granulosa en culture : nous avons pu montrer que le messager inactif y est present en meme quantite que le messager actif. Fsh induit une augmentation tres importante et parallele du taux des messagers actifs et inactifs. En revanche, l'androstenedione induit l'augmentation moderee mais exclusive du messager actif montrant l'existence possible de regulateurs specifiques. Le lapin semble etre un animal de laboratoire de choix pour analyser la regulation de l'expression du gene de l'aromatase : la presence d'un messager inactif permet d'envisager l'etude de son role exact. La grande similitude de sequence nucleique avec l'espece humaine permet d'esperer que les mecanismes de regulation du gene puissent etre similaires dans les deux especes.


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  • Détails : 106 P.
  • Annexes : 170 REF.

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