Auteur / Autrice : | Bertrand Helliot |
Direction : | Marie-Thérèse de Boucaud |
Type : | Thèse de doctorat |
Discipline(s) : | Biologie et physiologie cellulaires |
Date : | Soutenance en 1998 |
Etablissement(s) : | Bordeaux 1 |
Résumé
La conservation des ressources génétiques du genre Prunus représente aujourd'hui un enjeu important pour la sauvegarde de la biodiversité de ce genre. Les techniques traditionnelles de conservation présentent un certain nombre d'inconvénients qui peuvent être palliés par l'utilisation complémentaire de la cryoconservation dans l'azote liquide (-196°C). Dans une première partie, l'étude de l'impact de différents facteurs sur la reprise de croissance nous a permis de développer un protocole de congélation en deux étapes dans les conditions suivantes : acclimatation au froid des vitroplants 24 heures à 4°C, préculture des méristèmes 24 heures à 4°C sur un milieu de préculture contenant 5% de DMSO et 20% de proline ; cryoprotection des méristèmes de 45 minutes à 4°c dans une solution cryoprotectrice PVS-2 modifiée et contenant 5% de proline ; congélation à la vitesse de 5°C/min jusqu'à -40°C, stockage dans l'azote liquide et décongélation rapide dans un bain-marie à +40°C. Ce protocole nous a permis d'obtenir la régénération de 50 à 60% des méristèmes congelés. Dans une deuxième partie, l'étude de la stabilité des plants issus de la congélation et de différents plants témoins a été entreprise afin de déterminer l'impact, d'une part, des variations de températures engendrées par les cycles de congélation-décongélation et d'autre part, des différents cryoprotecteurs. Des techniques de biologie moléculaire (RAPD et AFLP) ont été principalement utilisées pour détecter du polymorphisme parmi les vitroplants congelés ou non. Nous avons observé une augmentation significative de la fréquence de réarrangement de l'ADN de certains vitroplants imputable à la cryoconservation.