Contribution a la regeneration par embryogenese somatique secondaire et caulogenese chez le pommier (malus x domestica borkh. ) en vue d'une mise au point de methodes de transformation genetique

par GAETAN DAIGNY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de BRIGITTE SANGWAN.

Soutenue en 1998

à Amiens .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Au cours de ce travail, nous avons mis au point une methode de regeneration par embryogenese somatique secondaire chez plusieurs cultivars de pommier (<single high-reversed-9 quotation mark>gloster 69<right single quotation mark>, <single high-reversed-9 quotation mark>golden delicious<right single quotation mark>, <single high-reversed-9 quotation mark>elstar<right single quotation mark>, <single high-reversed-9 quotation mark>jonagold<right single quotation mark>, <single high-reversed-9 quotation mark>fuji<right single quotation mark> et <single high-reversed-9 quotation mark>braeburn<right single quotation mark>), ainsi qu'un protocole de neoformation de bourgeons chez le cultivar <single high-reversed-9 quotation mark>gloster 69<right single quotation mark>. La culture de cotyledons d'embryons zygotiques immatures a permis d'obtenir des embryons somatiques primaires. Ces embryons sont a l'origine des premiers embryons somatiques secondaires et de cultures embryogenes repetitives. Nous montrons l'influence de plusieurs facteurs sur l'embryogenese somatique secondaire tels que l'association de trois regulateurs de croissance ana (5,3 m), bap (0,9 m) et kin (0,9 m), le tdz seul (10 m), la source glucidique (maltose), le gelifiant (phytagel), le type d'explants (embryons somatiques de grande taille > 7 mm et pseudo-cotyledons). Dans le meilleur des cas, la frequence d'embryogenese somatique secondaire atteint 75% (culture d'embryons somatiques) et 92% (culture de pseudo-cotyledons). L'amelioration de la qualite des embryons secondaires produits est obtenue par l'utilisation preferentielle de l'ana et des polyamines (putrescine 10 m et spermidine 10 m). Nous montrons que le type morphologique des embryons somatiques et l'application d'un traitement a l'aba (10 m), puis d'un traitement de dessiccation (solution minerale sursaturee de znso#4, 7h#2o), influencent le taux de conversion des embryons (de 5% a plus de 31%). Nous avons aussi developpe une autre methode de regeneration, par caulogenese, a partir d'embryons somatiques secondaires, de pseudo-cotyledons, d'embryons zygotiques et de fragments foliaires chez le cultivar <single high-reversed-9 quotation mark>gloster 69<right single quotation mark>. Plusieurs facteurs influencent la transformation genetique via agrobacterium tumefaciens des embryons somatiques et des pseudo-cotyledons : la duree de preculture, la duree de coculture, la duree d'inoculation, l'acetosyringone et la souche bacterienne. La competence cellulaire a la transformation genetique des axes embryonnaires et des cotyledons d'embryons zygotiques est egalement mise en evidence. Notre travail montre l'importance de plusieurs facteurs dans la transformation genetique d'explants foliaires chez le cultivar <single high-reversed-9 quotation mark>gloster 69<right single quotation mark> : la duree de preculture, la duree de coculture, la souche bacterienne et la longueur des feuilles.


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Informations

  • Détails : 226 P.
  • Annexes : 301 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Picardie Jules Verne. Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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