Purification, caractérisation et clonage de la glycérol-ester hydrolase intestinale de porc : un nouveau membre de la famille des carboxylesterases

par Laëtitia David-Guével

Thèse de doctorat en Biochimie de la nutrition. Aspects moléculaires et cellulaires

Sous la direction de Antoine Puigserver.

Soutenue en 1998

à Aix-Marseille 3 .


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  • Résumé

    Dans ce travail, nous avons dans un premier temps purifie la glycerol-ester hydrolase intestinale de porc jusqu'a l'homogeneite, grace a la delipidation partielle de la muqueuse intestinale, suivie de 7 etapes de purification dont 5 chromatographiques. Le facteur de purification obtenu est de 483 et l'activite specifique sur tributyrine de 290 moles/min/mg. Les caracteristiques physicochimiques et l'activite hydrolytique de l'enzyme sur divers substrats sont comparables a ceux decrits pour la glycerol-ester hydrolase intestinale de rat. L'enzyme intestinale de porc semble etre un trimere compose de sous-unites apparemment identiques de 60 kd, liees de facon non covalente. La sequence des 25 premiers residus de la proteine a ete etablie et presente une identite totale avec celle d'une carboxylesterase de foie de porc (ec 3. 1. 1. 1). En consequence, l'isoforme intestinale purifiee, de pi 5,1, est consideree maintenant comme appartenant a la famille des carboxylesterases. Afin de confirmer les resultats biochimiques, nous avons dans un second temps, construit une banque d'adnc a partir des arnm totaux de la muqueuse intestinale de porc et isole un adnc de pleine longueur correspondant a la glycerol-ester hydrolase. La sequence peptidique issue de celle en nucleotides permet d'affirmer sans equivoque que l'enzyme intestinale purifiee est bien une carboxylesterase. La preproteine est constituee de 565 acides amines dont 17 representent le peptide signal. La sequence obtenue montre 97% d'identite avec celle de la carboxylesterase de foie de porc et plus de 50% d'identite avec celles des autres carboxylesterases. Afin de completer l'etude des carboxylesterases intestinales, nous avons clone la carboxylesterase intestinale de rat et compare la sequence nucleotidique et la sequence en acides amines correspondant a celles des carboxylesterases hepatiques de differentes especes.

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  • Détails : 102 p

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  • Bibliothèque : Université d'Aix-Marseille (Marseille. Saint-Jérôme). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T 2627/A-B
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