Caracterisation structurale de biomolecules par spectrometrie de masse a desorption/ionisation laser assistee par matrice

par MARC MONIATTE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alain Van Dorsselaer.

Soutenue en 1997

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Ce travail de these montre l'interet de la spectrometrie de masse a desorption/ionisation laser assistee par matrice (maldi-tof ms) comme outil d'analyse structurale des proteines. Le principal objectif de ce travail etait d'ameliorer les performances de cette technique d'ionisation afin de l'integrer dans les strategies d'analyse du laboratoire. La premiere partie presente le principe de fonctionnement d'une source maldi et d'un analyseur a temps de vol (tof) avec une attention particuliere portee sur les parametres conditionnant la resolution et la qualite des spectres maldi-tof. La partie resultats presente le developpement d'approches analytiques nouvelles basees sur la technique d'ionisation maldi et leur application a des problemes de biochimie analytique difficiles a resoudre avec les techniques usuelles tels que (i) la localisation rapide de sites de clivage proteolytiques d'enzymes peu specifiques (proteases leucocytaires, cathepsines) sur des proteines membranaires (recepteur plaquettaires, app) (ii) l'identification precoce de molecules induites (peptides antibacteriens d'insectes, hormone androgene de crustace) directement a partir du tissus ou du fluide dans lequel elles sont produites ou vehiculees (iii) la verification de l'integrite des molecules (diptericine, hormone androgene) au cours de leur purification (iv) la determination de l'heterogeneite de glycosylation de proteines recombinantes (hlh, hfsh) (v) la determination de la stoechiometrie de complexation de proteines multimeriques de haut poids moleculaire (hemolysine, aerolysine). Les donnees presentees demontrent que l'obtention et la qualite des resultats passent par la maitrise de l'etape de preparation de l'echantillon. Un meilleur controle des differents parametres de cocristallisation de l'echantillon avec la matrice permet des ameliorations significatives en terme de sensibilite, de resolution et de precision sur la masse.


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Informations

  • Détails : 184 p.
  • Annexes : 150 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1997;2849
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