Analyse de la relation entre structure et fonction de reconnaissance antigene-anticorps, par mutagenese dirigee et analyse cinetique a l'aide d'un biocapteur

par NATHALIE RAUFFER BRUYERE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Marc H. V. Van Regenmortel.

Soutenue en 1997

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Le travail presente dans cette these concerne l'etude des relations entre structure et fonction de reconnaissance antigene-anticorps (ag-ac). Nous avons exprime dans e. Coli des antigenes proteiques et peptidiques modifies, ainsi que des fragments d'anticorps fab (antigen binding fragment) modifies. L'effet des modifications sur la cinetique de l'interaction ag-ac a ete quantifie par la technologie des biocapteurs (biacore, pharmacia), afin d'identifier les parametres structuraux qui influencent la liaison. Le biacore permet de suivre les interactions moleculaires en temps reel et de mesurer precisement les constantes cinetiques d'association et de dissociation caracterisant l'interaction. Grace a cette technologie, qui permet de mesurer de facon reproductible de tres faibles differences de comportement fonctionnel, nous avons pu montrer que certains residus situes a 15-20 a du site de liaison etaient capables de moduler l'affinite de liaison, et que des residus du site de liaison pouvaient agir en cooperation avec des residus situes loin de ce site. Des effets fonctionnels d'amplitude tres variable ont ete mesures pour des modifications mineures a l'interface d'un complexe ag-ac de structure connue. Ces effets ne correlent pas toujours avec les contributions calculees d'apres la structure. L'ensemble de nos resultats demontre la complexite des bases structurales de l'affinite de liaison ag-ac. La poursuite de telles analyses fonctionnelles tres detaillees et leur interpretation en fonction d'etudes structurales et dynamiques devraient permettre a long terme de moduler de maniere predeterminee l'affinite d'anticorps a interet medical ou biotechnologique.

  • Titre traduit

    Analysis of the relation between structure and antigen-antibody recognition by site-directed mutagenesis and kinetic analysis using biosensor technology


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Informations

  • Détails : 254 P.
  • Annexes : 172 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1997;2611
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1997
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