Biocapteur ampérométrique pour l'étude de l'inhibition des cholinestérases

par Graziella Turdean

Thèse de doctorat en Sciences et techniques de l'environnement

Sous la direction de Liviu Oniciu et de Daniel Thévenot.


  • Résumé

    Les methodes analytiques normalisees pour la detection des pesticides (insecticides, herbicides, fongicides) - substances tres toxiques - utilisent des techniques tres complexes (lc et hplc couplee a la spectrometrie de masse) pour l'identification et la quantification des polluants. Les biocapteurs amperometriques, associant l'enzyme cible de ces substances - l'acetylcholinesterase (ache) - sont des dispositifs analytiques tres performants de satisfaire aux normes cee. L'etude du processus d'oxydation de la thiocholine par voltamperometrie cyclique a permis l'identification du potentiel de pic, a environ + 740 mv/ag/agcl, kcl#s#a#t et a mis en evidence la diminution de cette valeur en presence de la phtalocyanine de cobalt. Le biocapteur amperometrique a ache immobilisee a l'aide de polyvinylalcool sur un fil de platine ( = 0. 17 mm) (teste dans tampon phosphate 1/15 m, ph 8, temperature 30c sous agitation et potentiel applique + 410 mv/ag/agcl, kcl#s#a#t) a les suivantes caracteristiques analytiques : sensibilite de 60 - 80 a/m, domaine de linearite jusqu'a 1 mm, temps de reponse 95% de max. 2 min. L'etude cinetique de fonctionnement de deux pesticides (trichlorfon, paraoxon) a permis l'identification d'une inhibition mixte non-competitive/incompetitive du processus et le calcul des constantes cinetiques. Cette inhibition induit une deviation de la cinetique de michaelis - menten avec un coefficient de <<<>cooperativite<>>> positif (x 1. 3) identifie a l'aide de trois representations graphiques (hill, hughes - klotz et scatchard). L'analyse du mecanisme induit par les solvants organiques sur l'ache - en tant qu'un phenomene d'inhibition - a permis l'identification d'une inhibition mixte competitive/non-competitive. Dans le cas de la presence simultanee du pesticide et du solvant organique, l'inhibition de l'ache est mixte non-competitive/incompetitive, comme dans le cas du pesticide en tampon. Le pourcentage d'inhibition du paraoxon en hexane est la somme du pourcentage de pseudo-inhibition induit par la presence de l'hexane et le pourcentage d'inhibition du paraoxon en solution aqueuse ; le pourcentage d'inhibition du paraoxon en acetonitrile est different de la somme du pourcentage de pseudo-inhibition de l'acetonitrile et le pourcentage d'inhibition du paraoxon en milieu tamponne.

  • Titre traduit

    Amperometric biosensors for the study of cholinesterases inhibition


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  • Détails : 1 vol. (156-156 p.)
  • Annexes : Bibliogr. : 303 réf

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