Biocapteur ampérométrique pour l'étude de l'inhibition des cholinestérases

par Graziella Turdean

Thèse de doctorat en Sciences et techniques de l'environnement

Sous la direction de Liviu Oniciu et de Daniel Thévenot.

Soutenue en 1997

à Paris 12 en cotutelle avec l'Université "Babes-Bolyai" Cluj Napoca .


  • Résumé

    Les methodes analytiques normalisees pour la detection des pesticides (insecticides, herbicides, fongicides) - substances tres toxiques - utilisent des techniques tres complexes (lc et hplc couplee a la spectrometrie de masse) pour l'identification et la quantification des polluants. Les biocapteurs amperometriques, associant l'enzyme cible de ces substances - l'acetylcholinesterase (ache) - sont des dispositifs analytiques tres performants de satisfaire aux normes cee. L'etude du processus d'oxydation de la thiocholine par voltamperometrie cyclique a permis l'identification du potentiel de pic, a environ + 740 mv/ag/agcl, kcl#s#a#t et a mis en evidence la diminution de cette valeur en presence de la phtalocyanine de cobalt. Le biocapteur amperometrique a ache immobilisee a l'aide de polyvinylalcool sur un fil de platine ( = 0. 17 mm) (teste dans tampon phosphate 1/15 m, ph 8, temperature 30c sous agitation et potentiel applique + 410 mv/ag/agcl, kcl#s#a#t) a les suivantes caracteristiques analytiques : sensibilite de 60 - 80 a/m, domaine de linearite jusqu'a 1 mm, temps de reponse 95% de max. 2 min. L'etude cinetique de fonctionnement de deux pesticides (trichlorfon, paraoxon) a permis l'identification d'une inhibition mixte non-competitive/incompetitive du processus et le calcul des constantes cinetiques. Cette inhibition induit une deviation de la cinetique de michaelis - menten avec un coefficient de <<<>cooperativite<>>> positif (x 1. 3) identifie a l'aide de trois representations graphiques (hill, hughes - klotz et scatchard). L'analyse du mecanisme induit par les solvants organiques sur l'ache - en tant qu'un phenomene d'inhibition - a permis l'identification d'une inhibition mixte competitive/non-competitive. Dans le cas de la presence simultanee du pesticide et du solvant organique, l'inhibition de l'ache est mixte non-competitive/incompetitive, comme dans le cas du pesticide en tampon. Le pourcentage d'inhibition du paraoxon en hexane est la somme du pourcentage de pseudo-inhibition induit par la presence de l'hexane et le pourcentage d'inhibition du paraoxon en solution aqueuse ; le pourcentage d'inhibition du paraoxon en acetonitrile est different de la somme du pourcentage de pseudo-inhibition de l'acetonitrile et le pourcentage d'inhibition du paraoxon en milieu tamponne.

  • Titre traduit

    Amperometric biosensors for the study of cholinesterases inhibition


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  • Détails : 1 vol. (156-156 p.)
  • Annexes : Bibliogr. : 303 réf

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