Analyses conformationnelles par spectroscopie rmn de neurotoxines de scorpion, d'une glutaredoxine et d'une chemokine

Nmr spectroscopy conformational analysis of scorpion neurotoxins, a glutaredoxin and a chemokine

• Auteur / Autrice : Sylvie Meunier
• Direction : Hervé Darbon
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1997
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

La determination des structures tridimensionnelles presentee dans ce memoire a ete realisee par spectroscopie r. M. N. Homononucleaire bi-dimensionnelle du proton. Les premieres molecules dont j'ai resolue la structure furent une toxine de scorpion, p05-nh#2, et son analogue, r6l,r7lp05-nh#2. La toxine naturelle, p05, est une molecule de 31 residus d'acide amine et elle bloque de maniere specifique les canaux potassium faible conductance actives par le calcium. La synthese de ces deux molecules et l'acquisition de donnees pour l'etude par r. M. N. Permirent de determiner leur structure et ainsi d'analyser les relations structure-fonction : l'origine de la specificite et l'orientation de la molecule par rapport au canal lors du phenomene de reconnaissance est le moment dipolaire des differentes molecules. Le deuxieme sujet aborde concerne la e9s glutaredoxine 3. Cette proteine de 82 residus d'acide amine est un analogue de la grx 3 de escherichia coli, donneur de proton pour la ribonucleotide reductase. Elle constitue en fait une troisieme voie pour la reduction de cette enzyme, necessaire a la synthese de l'adn. La determination de la structure tridimensionnelle a conduit a une analyse detaillee du site actif et du site de fixation du glutathion dans sgrx3 et il a ainsi ete possible de postuler pour une correlation entre la stabilisation et la nucleophilicite de la cystine du site actif. La determination de la structure tridimensionnelle d'une chemokine monocyte chemoattractant protein 3 (mcp-3) s'est averee un probleme plus ardu : cette molecule de 76 residus d'acide amine dimerise dans les conditions de ph et de concentration utilisees pour l'etude des structures par r. M. N. . Cette molecule est impliquee dans la migration et l'activation par chimiotactisme des cellules leucocytaires. L'acquisition de nombreux spectres dans differentes conditions a tout de meme conduit a une structure a basse resolution. Il est cependant evident que le dimere adopte par mcp-3 est de type sandwich , dimere normalement adopte par les chemokines. Il a ete possible d'isoler les determinants structuraux qui gouvernent la dimerisation dans la famille des chemokines et de postuler pour une implication de la dimerisation des chemokines dans l'activation des leucocytes et des lymphocytes au cours d'une inflammation.