La bothrojaracine : clonage, sequencage, expression et etudes fonctionnelles

par VERONIQUE AROCAS

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MARTINE JANDROT PERRUS.

Soutenue en 1997

à Paris 7 .

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  • Résumé

    La bothrojaracine est un inhibiteur specifique de la thrombine, enzyme clef de la coagulation. C'est une proteine de 27 kda isolee du venin de bothrops jararaca par zingali et coll. Et constituee de deux chaines polypeptidiques. La bothrojaracine n'interagit pas avec le site catalytique de l'enzyme mais bloque plusieurs de ses fonctions : coagulation du fibrinogene, activation plaquettaire, liaison a la fibrine et a la thrombomoduline. Nous montrons que la liaison de la thrombine- a la bothrojaracine immobilisee est de haute affinite (kd = 0. 7 nm) et implique au moins deux sites de la thrombine : l'exosite 1, specialise dans la reconnaissance de proteines cibles, et l'exosite 2 ou site de liaison de l'heparine. L'effet inhibiteur de la bothrojaracine s'exerce egalement sur la thrombine liee aux caillots de fibrine et resulte en partie d'un deplacement de la thrombine liee. La bothrojaracine inhibe egalement l'activation du facteur v par les traces de thrombine formees a la phase initiale de la coagulation et limite ainsi la generation massive de thrombine. De plus, nos resultats montrent que l'exosite 1 de la thrombine est essentiel pour la reconnaissance du facteur v par la thrombine, alors que l'exosite 2 ne joue pas de role. Nous avons clone la bothrojaracine a partir d'une banque d'adnc de glandes a venin et determine que les deux chaines sont codees par des arnm distincts. Leur coexpression par transfection transitoire a permis l'obtention de bothrojaracine recombinante active. La sequence de la bothrojaracine indique qu'elle appartient a une vaste famille de proteines de venin apparentees aux lectines de type c, dont elle est la premiere a avoir ete exprimee. Dans l'ensemble, nos resultats montrent que la bothrojaracine possede un mecanisme d'action original. Sa haute affinite pour la thrombine, sa liaison a la prothrombine, et sa capacite a inhiber la thrombine liee a la fibrine suggerent qu'elle pourrait etre un antithrombotique efficace.


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Informations

  • Détails : 201 p.
  • Annexes : 290 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1997
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