Synthese et ingenierie de l'aromatic l-amino acid decarboxylase aadc (e. C. 4. 1. 1. 28) du rat

par FATME JEBAI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MONIQUE KRIEGER.

Soutenue en 1997

à Paris 7 .

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  • Résumé

    La decarboxylase des acides amines aromatiques (aadc), deuxieme enzyme de la voie de biosynthese des cathecholamines (dopamine, adrenaline, noradrenaline) et des indolamines (serotonine, melatonine), utilise le pyridoxal-5'-phosphate (plp) comme coenzyme, elle appartient au groupe ii de la famille alpha des enzymes a plp. Ce memoire, est la description de l'approche genetique de l'etude structurale de l'aadc du pheochromocytome de rat. Il est presente en deux parties : i- etude de plusieurs vecteurs d'expression permettant d'optimiser la production de l'aadc dans le cytoplasme d'e. Coli : le vecteur d'expression pet 20b+ s'est revele particulierement approprie a notre problematique. Il permet la purification de la proteine aadc, supplementee de 6 histidines a l'extremite c terminale. Cette proteine est caracterisee par son activite specifique elevee, elle possede des proprietes pyhsico-chimiques semblables a celles obtenues pour l'aadc extraite de tissus de mammiferes. Ii- la construction par mutagenese dirigee de plusieurs mutants de l'aadc. L'expression dans e. Coli, ainsi que la caracterisation de chaque mutant par ses proprietes enzymatiques : dans cette etude nous avons utilise la methode hca (hydrophobic cluster analysis) pour predire la structure approchee de l'aadc, a partir de celles deja connues de l'aspartate aminotransferase, de la tryptophanase et de la 2,2-dialkylglycine decarboxylase. Cette etude nous a ainsi permis de localiser un certain nombre de residus du site actif de cette proteine. Nous nous sommes interesses, en particulier, a l'etude de trois acides amines (d271, c311, t246) susceptibles de participer au site enzymatique de cette enzyme. Ainsi on a pu montre que le residu d271 joue un role crucial au cours du mecanisme reactionnel de l'aadc, il forme une liaison hydrogene avec l'azote n(1) du plp, que l'acide amine t246 est probablement implique dans la fixation du substrat et que le residu cys 311 joue un role structural important pour l'aadc.


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  • Détails : 159 P.
  • Annexes : 256 REF.

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