Etude de la polyglutamylation des tubulines de souris au cours du developpement post-natal et caracterisation des modifications post-traductionnelles de la telokine de poulet

par FILIPPO RUSCONI DI LUGANO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JEAN ROSSIER.

Soutenue en 1997

à Paris 6 .

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  • Résumé

    L'heterogeneite de la tubuline est due au nombre important d'isogenes codant pour des proteines homologues (isotypes), mais egalement a des modifications post-traductionnelles nombreuses. Nous avons etudie la polyglutamylation des tubulines. L'heterogeneite des tubulines augmente lors du developpement post-natal dans le cerveau, et nous avons montre que l'augmentation de cette heterogeneite etait due a l'excision post-traductionnelle du glu#4#5#0, ce qui rend la tubuline non-tyrosylable (forme -2 de la tubuline ). Dans ce travail, les structures des chaines polyglutamyle laterales des peptides c-terminaux bi- et tri-glutamyles ont ete analysees par chromatographie. Nous avons compare les temps de retention de peptides synthetiques bi- et tri-glutamyles aux temps de retention de peptides c-terminaux biologiques de tubuline. Nous concluons que la majorite de l'heterogeneite supplementaire, observee lors du developpement post-natal des souris, est due a l'excision c-terminale du residu glu#4#5#0. La mlck (kinase de la chaine legere de la myosine) et la telokine sont deux proteines tres apparentees, qui possedent une queue c-terminale tres homologue de la region c-terminale des tubulines. La telokine est exprimee a partir d'un promoteur qui se trouve dans le gene de la mlck, sa structure primaire est donc identique a celle du domaine c-terminale de la mlck (157 residus c-terminaux). La telokine a ete analysee par spectrometrie de masse qui a montre qu'elle etait heterogene, avec sept pics de masse compris entre 15858 da et 17100 da. Une chromatographie echangeuse d'anions haute performance (hpl-deae) a permis de montrer que la telokine purifiee est tres heterogene, etant resolue en 13 pics. En combinant la chimie des proteines a la chromatographie et a la spectrometrie de masse, nous avons caracterise l'heterogeneite de la telokine. Celle-ci est concentree au niveau des extremites n- et c-terminales : trois residus n-terminaux acetyles ont ete detectes (ami-, mis-, et sgr-) et six peptides c-terminaux differents ont ete caracterises. Aucun des peptides n-terminaux n'a pu etre sequence. Enfin, le sequencage de peptides de telokine a permis de montrer qu'en position 27 de la structure primaire deux residus etaient presents : un residu aspartyle et un residu glutamyle, indiquant probablement un polymorphisme.


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Informations

  • Détails : 149 P.
  • Annexes : 125 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1997
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