Etude d'une paire de bases non canonique et de la liberation catalytique d'un nucleotide par le pyridoxal

par JEAN-JACQUES BEAUSSIRE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Philippe Ascher et de Sylvie Pochet.

Soutenue en 1997

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Dans une premiere partie, l'appariement non canonique entre les bases 5-methyl-isocytosine et purin-2-one a ete etudie par mesure de temperatures de fusion de doubles brins d'adn et par elongation d'amorces catalysee par le fragment de klenow de l'adn polymerase i d'e. Coli. Pour cela les nucleosides 2'-desoxy-5-methyl-isocytosine (d#5#m#eisoc) et 2'-desoxy-isoinosine (disoi, obtenu avec 90% de rendement par transglycosylation enzymatique utilisant un extrait brut de lactobacillus leichmannii) ont ete synthetises puis inseres dans des oligodesoxynucleotides selon la methode des phosphoramidites. Le derive 5'-triphosphate de disoi a egalement ete synthetise. La paire de bases etudiee est thermodynamiquement aussi stable que la paire canonique adenine/thymine. Le fragment de klenow depourvu d'activite 3'-5' exonucleasique incorpore disoi face a d#5#m#eisoc, mais aussi face a dt. Face a disoi, on observe l'incorporation de dt mais aussi de dg. Le nucleoside disoi presente un equilibre tautomerique dont les deux formes (lactime et lactame) varient en proportions selon le contexte. Dans une seconde partie, la liberation du nucleotide 2'-desoxythymidine 5'-monophosphate a partir de phosphodiesters a ete realisee in vitro dans des conditions physiologiques de ph et de temperature selon un processus catalyse par le pyridoxal en absence d'enzyme. Pour cette etude, la synthese de seryl thymidinyl phosphate et d'analogues a ete realisee. Les cinetiques de liberation du thymidylate a partir des phosphodiesters (10 mm) catalysee par le pyridoxal (1 mm) a ph 7,5 et a 37c mettent en evidence l'influence de l'extremite c-terminale de la serine sur le temps de demi-reaction : 6,4 heures pour une fonction amide, 35,8 heures pour une alanine et 144,6 heures pour une extremite carboxylique libre. La meme reaction de clivage est catalysee par un analogue non biologique du pyridoxal, le benzene sulfonate de 4-formyl-1-methyl-pyridinium.


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  • Détails : 178 P.
  • Annexes : 92 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1997
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