Etudes de differentes proteines interagissant avec la proteine rna15 impliquee dans la maturation des extremites 3' des arn messagers de saccharomyces cerevisiae

par NADIA AMRANI

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de François Lacroute.

Soutenue en 1997

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Le complexe de clivage et de polyadenylation cfi est l'un des quatre complexes necessaires a la maturation des extremites 3' des arn messagers de levure. Les proteines codees par les genes rna14 et rna15 appartiennent a ce complexe. Dans le but de trouver des proteines associees a la proteine rna15, nous avons cherche des suppresseurs extrageniques capables de supprimer le defaut de croissance du mutant thermosensible rna15-2. Un allele mutant (appele ssm5-1) du gene essentiel sts1 deja connu est capable de supprimer partiellement la thermosensibilite et le defaut de maturation des messagers dus a la mutation rna15-2. Nous avons confirme la localisation cytosolique de la proteine sts1 par des techniques d'immunofluorescence. Des analyses par western blot ont montre que des extraits des souches thermosensibles rna15-2, rna14-1 et pap1-1 contiennent tres peu de proteine rna15 a 37c. La mutation ssm5-1 retablit le taux de la proteine rna15 dans la souche double mutante rna15-2 ssm5-1. L'utilisation du systeme double-hybride suggere que la proteine sts1 agit sous la forme d'un homomultimere, mais ne montre pas d'interaction directe avec la proteine rna15. Un role de la proteine sts1 dans le transport de la proteine rna15 du cytoplasme vers le noyau reste une hypothese probable pour expliquer la suppression exercee par ssm5-1 sur rna15-2. Nous avons ensuite identifie un nouveau gene essentiel, pcf11, dont le produit interagit avec celui des genes rna14 et rna15 dans le systeme double hybride. Des alleles thermosensibles de ce gene sont letaux synthetiques des alleles thermosensibles des genes rna14 et rna15. Des extraits proteiques de souches mutees dans le gene pcf11, ou de souche sauvage dont la proteine pcf11 est immunoneutralisee, montrent une deficience dans le clivage et la polyadenylation in vitro de l'extremite 3' du messager du gene cyc1. De plus, les proteines pcf11 et rna15 sont localisees dans le complexe cfi partiellement purifie par chromatographie sur colonne mono q. Ces resultats montrent que pcf11 code pour un troisieme composant du complexe cfi. Nous avons aussi montre que la proteine pab1 est un composant du complexe de maturation des extremites 3' des arn messagers et qu'elle intervient dans le controle de la taille de la queue de poly(a). Cette proteine interagit specifiquement avec la proteine rna15 dans le systeme double hybride et dans des experiences de coimmunoprecipitation. De plus, l'effet de la mutation rna15-2 est partiellement supprime par une surexpression de la proteine pab1. Cette proteine est localisee comme la proteine rna15 dans le complexe cfi partiellement purifie sur colonne mono q. Dans des tests in vitro avec des extraits proteiques d'une souche mutee thermosensible pab1 ou de la souche sauvage dont la proteine pab1 est immunoneutralisee, le clivage en 3' des arn messagers est normal ; par contre, les queues de poly(a) synthetisees sont beaucoup plus longues qu'en presence de la proteine pab1. Cette anomalie de polyadenylation est corrigee par addition de proteine pab1 recombinante, et n'est pas due a une inhibition d'activite nuclease. Ceci montre donc un controle de la longueur de la queue de poly(a) par la pab1 associee au complexe cfi.


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  • Détails : 163 P.
  • Annexes : 255 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1997
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