Etude du transporteur vesiculaire des monoamines : purification et caracterisation de domaines fonctionnels

par CORINNE SAGNE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Pierre Henry.

Soutenue en 1997

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Dans les neurones monoaminergiques et certaines cellules endocrines, les monoamines sont accumulees dans des organites specialises, permettant leur liberation par exocytose lors d'une stimulation de ces cellules. L'accumulation est due a un antiport proton/monoamine dont est responsable le transporteur vesiculaire des monoamines (vmat), qui utilise le gradient electrochimique de protons transmembranaire cree par une atpase translocatrice de protons. Le transporteur est inhibe selectivement par la reserpine, la tetrabenazine et la ketanserine. Nous nous sommes attaches a caracteriser la structure de vmat. Tout d'abord, nous avons mis au point une technique de purification originale, par agregation selective, de l'isoforme vmat2, majoritaire dans les granules de la medullo-surrenale bovine. Cette methode est susceptible d'etre appliquee a d'autres proteines membranaires. L'etude de l'agregation nous a egalement permis de proposer qu'il existe des structures secondaires extremement stables dans vmat2 qui ne peuvent etre denaturees que par l'acide trifluoroacetique anhydre. Ensuite, nous avons localise un domaine de liaison de la ketanserine sur la sequence primaire de vmat2 a l'aide d'un derive photoactivable, l'azik. En combinant le sequencage de peptides derives du transporteur purifie a la mutagenese dirigee d'un site de proteolyse de vmat2, nous avons montre que l'azik se fixe sur son domaine n-terminal, precisement entre les residus 2 et 55 (sur 518 acides amines). Enfin, nous avons initie une etude experimentale de la topologie de vmat2 par traduction in vitro en utilisant des sites de glycosylation comme rapporteurs de topologie. D'autre part, la mutagenese des extremites n- et c-terminales de bvmat2 semble indiquer qu'elles ne participent pas a l'activite de transport.


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Informations

  • Détails : 210 P.
  • Annexes : 250 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1997
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