Production d'un anticorps bispecifique pour la detection des duplex d'acides nucleiques apres hybridation moleculaire : application au diagnostic microbiologique

par JACQUES AURIOL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JEAN-LUC GUESDON.

Soutenue en 1997

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Une cellule hybride (quadrome) a ete produite par fusion cellulaire d'un hybridome murin produisant des anticorps monoclonaux anti-acetylaminofluorene avec un hybridome produisant des anticorps anti-phosphatase alcaline. Des clones hybrides produisant des immunoglobulines possedant les deux specificites parentales et une activite bispecifique ont ete isoles. L'anticorps bispecifique a ete purifies et caracterise. Il a ete utilise pour developper un test d'immunodetection non radioactif des sondes a adn ou a arn ayant une limite de detection de 5 pg d'adn. Ce systeme d'immunodetection a ete applique a l'etude epidemiologique par ribotypage de 35 souches de neisseria meningitidis de serogroupe a provenant d'europe et d'afrique. Un test utilisant la pcr pour amplifier la region intergenique 16s-23s a ete utilise et ces deux techniques ont ete comparees avec les resultats obtenus avec d'autres marqueurs : le serotypage et le multilocus electrophoresis enzyme. Un test de dosage par competition utilisant l'anticorps bispecifique a ete developpe pour quantifier la fixation de l'aaf sur l'adn permettant de doser 2 pmoles d'aaf. Cette technique a ete utilisee pour valider la synthese et evaluer la purification de dgtp modifie par le n-acetoxy-n 2-acetyl-aminofluorene (dgtp-aaf). Il a ete montre que le dgtp-aaf pouvait etre un substrat pour l'enzyme desoxynucleotidyl transferase terminale (tdt). Des oligonucleotides marques enzymatiquement en 5' par la tdt ont pu ainsi etre utilises comme sonde dans un test d'hybridation sandwich utilisant des oligonucleotides de capture lies de facon covalente sur une microplaque


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Informations

  • Détails : 245 P.
  • Annexes : 351 REF.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 1997 11
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1997
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