Etude du mecanisme d'insertion membranaire de proteines polytopiques dans la membrane cytoplasmique d'e. Coli

par CAROLE GWIZDEK

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Gérard Leblanc.

Soutenue en 1997

à Nice .

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  • Résumé

    La comprehension du (ou des) mecanisme selon lequel une proteine s'insere dans la membrane cytoplasmique bacterienne est encore largement meconnu. En particulier, il n'a pu etre clairement demontre si cette insertion dans la membrane et la translocation au travers de cette membrane empruntent des voies communes. De meme, les besoins energetiques requis pour l'insertion membranaire restent a preciser. Nous avons montre lors d'etudes in vivo, que l'assemblage membranaire de la melibiose permease (melb), transporteur na+/sucre d'e. Coli a 12 segments transmembranaires, necessite le gradient electrochimique de protons mais est independant des proteines sec, proteines strictement requises lors de la translocation. Ces resultats suggerent que l'insertion dans la membrane cytoplasmique d'e. Coli de proteines telles que melb est un processus fondamentalement different de la translocation au travers de cette meme membrane. Afin de mieux caracteriser ce processus d'insertion membranaire, nous avons initie une etude visant a mettre en evidence in vivo des intermediaires cinetiques d'assemblage membranaire de melb c'est-a-dire des permeases en cours d'insertion membranaire, s'accumulant aux etapes limitantes du processus. Enfin, dans le but de preciser les besoins proteiques et energetiques de l'insertion membranaire de melb par des etudes in vitro, nous avons recherche un critere permettant de verifier l'insertion correcte et l'activite de melb synthetisee dans ces conditions. Nous avons, pour ce faire, dresse une cartographie des sites de coupure de la permease pour un certain nombre de proteases et montre un effet protecteur specifique de la fixation de ses co-substrats pour certaines de ces coupures. La proteolyse menagee apparait donc comme un outil permettant d'acceder a la topologie et a l'activite de melb.


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Informations

  • Détails : 134 P.
  • Annexes : 228 REF.

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