Evaluation des activités antioxydantes de nouvelles molécules séléniées par méthode in vitro utilisant la culture cellulaire et la cytométrie de flux

par Serge Ostrovidov

Thèse de doctorat en Biologie structurale, moléculaire et cellulaire

Sous la direction de Francine Belleville-Nabet.

Soutenue en 1997

à Nancy 1 .


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  • Résumé

    Les espèces oxygénées réactives (ROS) sont des métabolites normaux de la cellule. Cependant en trop grande quantité, ils deviennent néfastes pour l'hôte. Aussi afin de rechercher de nouvelles molécules séléniées ayant une activité antioxydante, nous avons créé un modèle expérimental basé sur la culture de cellules hybridomes Mark 3 et la mesure du taux de radicaux libres intracellulaires par cytométrie en flux à l'aide des sondes fluorescentes DHR 123 et DCFH-DA respectivement spécifiques de l'anion superoxyde (O2-) et des peroxydes (ROOH). Après une étude des effets d'un stress oxydant par H2O2 sur la prolifération cellulaire et sur la formation des ROS intracellulaires notre modèle expérimental a été validé par la mesure de l'activité antioxydante de la vitamine E, la mélatonine, le Ginkgo bibola (Tanakan ®) et la N-acétylcystéine. Nous avons alors effectué un "screening" antioxydant sur 34 composés de synthèse analogues de l'ellipticine et les avons classés selon la force de leur activité antioxydante. Enfin après sélection d'une de ces molécules pour ses propriétés antioxydantes, une étude plus approfondie de son activité a été effectuée afin de déterminer la nature des ROS préférentiellement éliminés par celle-ci ainsi que les compartiments cellulaires où elle agit. De plus il est à noter que ce modèle expérimental construit pour rechercher des activités antioxydantes peut aussi être utilisé pour rechercher des activités oxydantes ce qui peut être utile à la recherche d'anti-tumoraux.

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