Rôles biologiques des enzymes de N-déglycosilation : recherche du gène de l'Endo-N-acétyl-[bêta]-D-glucosaminidase de radis (Raphanus sativus)

par Aline Menudier-Lachaise

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Ioannis Karamanos.


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  • Résumé

    Le travail entrepris a pour objectif la comprehension de l'implication des enzymes de n-deglycosylation dans le cycle de vie des vegetaux. La recherche du gene de l'endo-n-acetyl-beta-d-glucosaminidase de raphanus sativus (engase r) a ete menee suivant 4 strategies differentes, conditionnees par le fait qu'aucun renseignement de sequence d'engase eucaryote n'etait disponible. La purification des proteines ayant une activite engase ainsi que le reperage des proteines grace a l'utilisation d'anticorps anti-engase bacterienne ont conduit a suspecter l'existence, chez le radis, de deux engases de masses moleculaires d'environ 20 et 55 kda, dont aucune information de sequence n'a ete obtenue. Des tentatives d'amplification par reaction de polymerisation en chaine a l'aide d'amorces heterologues choisies dans les regions conservees des engases bacteriennes n'ont produit aucun amplifiat interessant. Enfin une derniere approche a ete imaginee suite a la mise en evidence d'une difference d'activite engase entre deux stades de developpement du radis (graines imbibees pendant 15 h et cotyledons de plantules etiolees agees de 3,5 jours). Il s'agit d'un criblage differentiel d'une banque d'adnc de radis destine a selectionner les arnm presents a un taux plus important dans les cotyledons de plantules etiolees que dans les graines imbibees. Les clones selectionnes ont ete tries par sequencage partiel et analyse informatique des sequences. Les 15 adnc resultant de ce tri sont des candidats potentiels pour etre des adnc d'engase r car ils ne possedent aucune homologie avec des proteines de plantes ou meme d'autres organismes. Les etudes d'expression de ces adnc n'ont pas permis de retrouver l'activite recherchee. Les 61 autres clones issus du criblage correspondent a des proteines decrites chez les vegetaux et leur expression differentielle est discutee.

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Informations

  • Détails : 120 p

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  • Bibliothèque : Université de Limoges (Section Sciences et Techniques). Service Commun de la documentation.
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