Production d'analogues du VIP (Vasoactive Intestinal Peptide) : Développement d'un procédé basé sur les technologies du génie génétique et enzymatique

par Anthony Ottavi

Thèse de doctorat en Sciences de la vie. Biochimie

Sous la direction de Raymond Julien et de Yves Cenatiempo.


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  • Résumé

    Le vip, un neuropeptide basique de 28 acides amines ayant une extremite cooh amidee, appartient a la meme famille que la secretine et le glucagon. Il intervient principalement dans la vasodilatation, la relaxation des muscles lisses et la stimulation des glandes exocrines. Le nombre d'applications potentielles de ce peptide, a conduit au developpement d'un systeme pour son expression dans e. Coli sous la forme d'un multimere. Dans ce systeme, developpe par j. Raingeaud au cours de sa these, le vip est produit sous la forme d'un melange de peptides analogues rallonges a leur extremite cooh. Sur cette base, le present travail de these tente de produire un analogue bioactif unique du vip en utilisant le meme principe des multimeres. Ensuite, afin d'obtenir un peptide en tous points identique au vip naturel, et par la meme occasion de poser les bases d'un processus extensible a l'obtention d'autres peptides amides, une strategie melant la biologie moleculaire et la synthese peptidique enzymatique a ete developpee. La sequence nucleotidique a ete modifiee par pcr pour obtenir, apres expression dans e. Coli, une structure polymerisee enchainant plusieurs unites de vip. Chacune de ces unites desormais de 26 acides amines est encadree par les sites de clivages du facteur xa et de la collagenase de vibrio alginolyticus. Le clivage par ces deux proteases genere un analogue raccourci du vip : le vip26. En se basant sur des resultats obtenus avec des peptides modeles de petite taille, le couplage des deux derniers acides amines amides (leu-asn-nh#2) manquants a ete tente sur l'analogue vip26. Cette reaction a ete conduite a l'aide de la thermolysine, une metalloprotease, dans des conditions de synthese peptidique thermodynamiquement controlees. Le developpement d'un systeme de ce type, couplant genie genetique et ingenierie des proteines sera potentiellement transposable a d'autres peptides necessitant une amidation pour le maintien de leur activite.

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Informations

  • Détails : 138 p

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  • Bibliothèque : Université de Limoges (Section Sciences et Techniques). Service Commun de la documentation.
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