Etude des relations structure/fonction des dextrane-saccharases de leuconostoc. Mesenteroides nrrl b-1229 & nrrl b-512f

par VINCENT MONCHOIS

Thèse de doctorat en Biologie et génétique moléculaires et cellulaires. Biotechnologie

Sous la direction de RENE-MARC WILLEMOT.

Soutenue en 1997

à Toulouse, INSA .

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  • Résumé

    Les dextrane-saccharases, enzymes produites par l. Mesenteroides et streptococcus, catalysent la synthese de dextrane a partir de saccharose et d'oligosides lorsque du maltose est ajoute dans le milieu reactionnel. Le dextrane produit par l. Mesenteroides nrrl b-512f contient des liaisons (1-6) et celui produit par l. Mesenteroides nrrl b-1299, des liaisons (1-6) et (1-2). Le gene codant pour une dextrane-saccharase de l. Mesenteroides nrrl b-512f, dsrs, etait clone au debut de notre etude. La caracterisation de dsrs a montre qu'il s'agit de l'enzyme responsable de l'activite extracellulaire detectee chez l. Mesenteroides nrrl b-512f. Les mutations des acides amines, asp-511, asp-513, asp-551 et his-661, presents dans le domaine n-terminal catalytique de dsrs ont montre que ces acides amines sont des acides amines essentiels. Les effets de la mutation affectant asp-551, acide aspartique implique dans la formation d'un complexe covalent glucosyl-enzyme, sur la synthese de dextrane et d'oligosides tendent a remettre en cause le mecanisme impliquant la presence de deux sites nucleophiles. L'effet des deletions du domaine c-terminal de liaison au dextrane de dsrs sur la synthese de dextrane et d'oligosides montre que ce domaine module la vitesse initiale de reaction, n'intervient pas directement dans le mecanisme catalytique et faciliterait la liberation des produits, dextrane ou oligosides, hors du site actif. Le criblage au niveau nucleotidique de banques d'adn genomique de l. Mesenteroides nrrl b-1299 a permis d'isoler deux genes, dsra et dsrb, codant pour des dextrane-saccharases. Dsra est une proteine de 145 kda qui synthetise un dextrane insoluble compose de 85% de liaisons (1-6) et 15% de liaisons (1-3). C'est, d'autre part, la premiere glucosyltransferase isolee ne possedant pas de peptide signal. Dsrb, de sequence tres proche de celle de dsrs, est une proteine de 160kda qui produit un dextrane soluble compose de 95% de liaisons (1-6). Il apparait donc que l. Mesenteroides b-1299 produit des dextrane-saccharases autres que celles responsables de la synthese de dextrane compose de liaisons (1-2) et (1-6).

  • Titre traduit

    Structure/function relationships of dextransucrases from leuconostoc. Mesenteroides nrrl b-1299 & nrrl b-512f


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Informations

  • Détails : 215 P.
  • Annexes : 218 REF.

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  • Bibliothèque : Institut national des sciences appliquées. Bibliothèque centrale.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1997/442/MON
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