Le minicercle : un nouveau support genetique pour le transfert de genes

par ANNE-MARIE DARQUET

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Daniel Scherman.

Soutenue en 1997

à l'INA .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Les plasmides recombinants utilises en therapie genique non virale ont l'inconvenient de porter une origine de replication bacterienne ainsi qu'une cassette de resistance a un antibiotique qui pourraient eventuellement se propager dans des bacteries endogenes des patients traites. Nous avons concu de nouvelles molecules d'adn superenroulees, derivant de plasmides bacteriens, depourvues de toutes les sequences non necessaires a l'expression du transgene. Ces constructions ont ete nommees minicercles. Elles sont obtenues in vivo chez e. Coli par une recombinaison specifique de site. Celle-ci s'opere entre les deux sites attp et attb, intervenant dans le mecanisme d'integration du phage lambda, clones de part et d'autre de la cassette d'expression du transgene. Elle conduit a l'excision d'un miniplasmide portant les fonctions plasmidiques indesirables et a la formation d'un minicercle constitue uniquement de la cassette therapeutique et du site recombine attr. Outre le gain de securite, l'elimination du squelette bacterien permet de reduire sensiblement la taille des vecteurs utilises, et d'eliminer d'eventuelles sequences bacteriennes potentiellement immunogenes. L'efficacite de transfection de minicercles a ete comparee, in vitro, a celle des plasmides les ayant generes. L'efficacite de transfection mesuree pour les minicercles est de 2 a 10 fois superieure, suivant le type cellulaire teste, a celle obtenue avec les plasmides non recombines, dans des conditions de molarite de cassette d'expression et d'adn total identiques. Une comparaison identique a ete realisee in vivo par injection d'adn nu dans le muscle tibial cranial de souris ou dans des tumeurs experimentales induites dans les flancs de souris nude. L'activite des genes rapporteurs clones sur des minicercles est 13 a 50 fois superieure a celle obtenue avec des plasmides classiques. Des etudes histologiques ont montre que l'injection de minicercles conduisait a un nombre de myofibres transfectees significativement superieur a celui obtenu avec des plasmides standards, accompagne d'une reduction apparente des dommages causes aux myofibres. Les minicercles constituent donc un nouveau de type de vecteur utilisable en therapie genique, en apparence plus sur et plus efficace que les plasmides recombinants utilises jusqu'a present.


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Informations

  • Détails : 161 P.
  • Notes : CONFIDENTIEL JUSQU'EN 0698
  • Annexes : 226 REF.

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