Etude de la regeneration in vitro de quelques ormes en vue d'une mise au point de methodes de transformation genetique

par HATEM BEN JOUIRA

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MARC JULLIEN.

Soutenue en 1997

à l'INA .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Nous avons mis au point deux methodes de regeneration chez deux clones d'orme : commelin et sapporo gold 2. La premiere utilise de minces fragments de tiges (cambium). Les pousses se developpent en 5 semaines sur un seul milieu sans regulateurs de croissance. Tous les explants initient 15 a 20 bourgeons pour commelin ; 7 pousses s'allongent suffisamment pour etre enracinees. Le rendement est plus faible pour sapporo gold 2. La capacite de regeneration est maximum pendant le repos vegetatif de l'arbre et minimum pendant la croissance vegetative. Le stockage au froid des tiges permet d'echapper a ces variations. La deuxieme methode utilise des disques foliaires. La regeneration est obtenue en deux etapes et depend de l'utilisation d'agarose lsm. L'induction des bourgeons est favorisee par le tdz et par le sorbitol ou le maltose. L'allongement depend de la diminution de la concentration du tdz ou de son remplacement par la bap, de l'addition de ga#3 et de l'utilisation du maltose pour commelin et d'un melange de sorbitol et de maltose pour sapporo gold 2. Dans ces conditions, tous les explants regenerent 9 a 15 bourgeons et 4 a 7 pousses. Sauf dans le cas des pousses issus du cambium de sapporo gold 2, l'enracinement et l'acclimatation sont facilement obtenus. A partir de ces systemes, nous avons tente d'etablir des protocoles de transformation via agrobacterium tumefaciens, contenant le vecteur binaire pkygusint. Dans le cas du cambium de commelin, la regeneration a ete partiellement inhibee apres coculture avec a. Tumefaciens. Des pousses ont ete obtenues a partir d'explants cocultives avec lba4404. Toutefois, une etude histochimique et une analyse par pcr (gus) montrent que ces pousses ne sont pas transformees. Dans le cas des disques foliaires de sapporo gold 2, la regeneration a ete plus ou moins inhibee a toutes les etapes du protocole. L'expression de gus a ete observee sur les disques foliaires co-cultives avec gv3101-pmp90, jusqu'a la neoformation des bourgeons. Cependant les quelques bourgeons obtenus, ne se sont pas allonges.


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  • Détails : 223 P.
  • Annexes : 246 REF.

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