Reconstitution in vitro des fusions d'endosomes chez dictyostelium discoideum : mecanismes moleculaires et place dans la voie endocytaire

par Olivier Laurent

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MICHEL SATRE.

Soutenue en 1997

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Le cytoplasme des cellules eucaryotes contient de nombreux compartiments membranaires fermes, capables de fusionner entre eux afin de maintenir leurs proprietes et leur composition. Ces fusions sont etroitement regulees dans le temps et l'espace. Ce manuscrit decrit l'etude des mecanismes moleculaires permettant cette regulation au sein de la voie endocytaire de l'amibe dictyostelium discoideum. Afin de realiser cette etude, un protocole permettant de reconstituer in vitro les fusions des compartiments endocytaires a ete mis au point. Il repose sur le marquage de la voie endocytaire par de la peroxydase de raifort biotinylee ou par de l'avidine, deux marqueurs dont l'internalisation par pinocytose a ete caracterisee chez dictyostelium discoideum. Grace a cette approche, il a ete possible de demontrer que chez cette amibe, seuls les compartiments endocytaires precoces ne contenant pas d'enzymes hydrolytiques sont capables de fusionner. Cette fusion est controlee par la petite proteine g rab7 dont l'implication dans le recyclage des enzymes depuis les post-lysosomes a ete recemment evoquee dans la litterature. Sur la base de ces resultats, la voie endocytaire de dictyostelium discoideum serait constituee d'une etape precoce de fusions permettant le melange du materiel nouvellement ingere et d'enzymes recyclees depuis la fin de la voie endocytaire, suivie d'une etape de maturation. Il a egalement ete possible de demontrer que l'atp soluble n'est pas necessaire aux fusions des endosomes precoces de dictyostelium discoideum. Paradoxalement le nem et l'a485 sont capables d'inhiber la fusion de ces endosomes, donnees dans la litterature comme dependant de l'atpase nsf. Pris ensemble, ces resultats suggerent un recrutement tres precoce de nsf lie a de l'atp sur les membranes allant fusionner, precedant meme leur association (<<<>docking<>>>). Le role de nsf reste neanmoins posterieur a celui de rab7.


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  • Détails : 141 P.
  • Annexes : 130 REF.

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