Etudes fonctionnelles et structurales de l'asparaginyl-arnt synthetase de thermus thermophilus

par LAURENCE SEIGNOVERT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de REUBEN LEBERMAN.

Soutenue en 1997

à Grenoble 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le gene d'une aminoacyl-arnt synthetase de classe iib, l'asparaginyl-arnt synthetase (asns) de thermus thermophilus hb8 a ete clone et sequence. Ce gene code pour une proteine de 438 acides amines. L'usage des codons du gene asns est similaire a l'usage caracteristique des genes des bacteries du genre thermus, ou le genome a un contenu en g+c de 67%. La composition en acides amines montre un changement dans la frequence d'utilisation de certains acides amines comparee aux proteines mesophiles. Ces changements pourraient expliquer la stabilite thermique des proteines de cet organisme. L'expression du gene asns de t. Thermophilus chez e. Coli a permis de surproduire et de purifier simplement l'enzyme thermostable. Les etudes biochimiques realisees sur la proteine recombinante montrent une thermostabilite remarquable ; l'enzyme garde 50% de son activite initiale d'aminoacylation apres 1h d'incubation a 90c ou 21h a 85c. Des cristaux de l'enzyme ont ete obtenus a partir de solution de peg 6000. Une etude par diffraction aux rayons x a permis de resoudre la structure tridimensionnelle de la premiere asparaginyl-arnt synthetase a 2. 75 a de resolution. L'analyse structurale montre de fortes similarites avec les deux autres enzymes de classe iib, l'aspartyl-et la lysyl-arnt synthetases. Cette analyse confirme la sous-classification des aars basee sur des comparaisons de sequences. Une etude par diffraction aux rayons x des cristaux de proteine complexee a son substrat, atp ou a l'intermediaire de la reaction, l'asparaginyl-adenylate a permis d'elucider les mecanismes utilises par ces aminoacyl-arnt synthetases pour assurer la specificite et la discrimination des substrats lors de la premiere etape de la reaction d'aminoacylation. La derniere partie de ce travail a ete la determination de la sequence codante pour l'arnt#a#s#n de t. Thermophilus. L'arnt#a#s#n a alors ete surproduit par transcription in vitro. Les premiers tests d'aminoacylation indiquent que le transcrit est fonctionnel.


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 181 P.
  • Annexes : 168 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire de Sciences.
  • Disponible pour le PEB
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.