Perception d'un signal xyloglucane par des proteines membranaires et mise en evidence d'activite xyloglucane endotransglycosylase induite

par CHRISTOPHE DUNAND

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Hugues Driguez.

Soutenue en 1997

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Afin de relier l'activite biologique du motif actif des xyloglucanes a la reconnaissance par des proteines membranaires, nous avons adopte une approche biochimique de detection basee sur l'utilisation de tests immunoenzymatiques. Nous avons utilise le dimere -l-fuc (12)--d-gal marque avec de la digoxigenine ou de la biotine et des proteines solubilisees provenant de fractions enrichies en plasmalemme isolees de protoplastes de rubus, pour modeliser les interactions ligand-recepteur. Les resultats obtenus ont montre qu'une proteine membranaire de 62 kda est capable de fixer le dimere fuc-gal et que cette fixation est saturable et reversible. Par ailleurs, le deplacement competitif de la fixation montre une inhibition de l'activite de liaison a la fois par des analogues structuraux (xxfg, fuc-gal-glc, fuc-gal-xyl) et par des phytohormones (2,4-d, kinetine, ga#3, acide abscissique). Cependant, a ce stade de nos travaux, il n'est a pas encore etabli que ces structures proteiques correspondent a des recepteurs de xyloglucane. Une technique de determination de l'activite xyloglucane endotransglycosylase par tests immunoenzymatiques a ete mise au point et a permis de mettre en evidence une activite induite par differents signaux. Le polymere de xyloglucane marque avec de la digoxigenine et l'oligomere xxlgbsa sont utilises comme substrats pour la reaction enzymatique. Les solutions enzymatiques testees sont extraites a partir de fractions microsomales provenant de protoplastes de rubus temoins ou traites. Grace a une sequence d'anticorps (primaire, secondaire et tertiaire), l'activite transferase est suivie en mesurant l'activite peroxydase. Les avantages de cette nouvelle methode sont la sensibilite de la detection et la possibilite d'analyser plusieurs echantillons simultanement.


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  • Détails : 119 P.
  • Annexes : 137 REF.

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