Préparation et utilisation d'anticorps monoclonaux pour caractériser le polypeptide bob TIP 106 du tonoplaste des cellules de chou-fleur (Brassica oleracea L. Var. Botrytis)

par Pascale Seddas

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de Francis Marty.

Soutenue en 1997

à Dijon .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Une banque d'anticorps monoclonaux specifiquement diriges contre des epitopes du tonoplaste des cellules en differenciation du meristeme inflorescentiel de chou-fleur (brassica oleracea l. Var. Botrytis) a ete construite. L'anticorps monoclonal tem 106 qui est specifiquement dirige contre un polypeptide majoritaire (12%) du tonoplaste a ete selectionne. Le polypeptide reconnu par tem 106 a ete appele bob tip 106 pour signifier qu'il s'agit d'un polypeptide de 106 000 daltons intrinseque du tonoplaste de brassica oleracea l. Var. Botrytis. Bob tip 106 est glycosyle et contient des residus mannose ou glucose mais l'epitope est peptidique. Par immuno-microscopie, nous avons montre que bob tip 106 est specifiquement associe au tonoplaste et que l'epitope est localise a sa face luminale. Bob tip 106 a ete solubilise et separe des autres constituants de la membrane par centrifugation en gradient de densite. Bob tip 106 co-migre avec la v-atpase. Des immuno-precipitations croisees ont montre que bob tip 106 et la v-atpase sont solidaires et constituent vraisemblablement un complexe proteique dans le tonoplaste. La membrane des vesicules a clathrine contient la v-atpase mais ne contient pas bob tip 106. L'anticorps monoclonal tem 106 a ete utilise pour reperer dans la banque d'adnc de chou-fleur les clones producteurs de la sequence peptidique contenant l'epitope. Un insert de 2 400 pb a ete isole. Il s'hybride avec des arnm de 3,2 kb susceptibles de coder le polypeptide bob tip 106. Les microsequences peptidiques internes seront comparees aux sequences peptidiques putatives deduites des sequences nucleotidiques pour s'assurer de la validite du reperage immunologique. L'expression des genes codant bob tip 106 a ete localisee dans les tissus du chou-fleur par hybridation. Les transcrits sont abondants dans les cellules du meristeme. Nous avons montre que les transcrits putatifs bob tip 106 s'accumulent dans les tissus en conditions de contrainte hydrique

  • Titre traduit

    Production of monoclonal antibodies to characterize the tonoplastic polypeptide bob tip 106 of cauliflower cells (brassica oleracea l. Var. Botrytis)


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Informations

  • Détails : 1 vol. (195-[23] p.)
  • Annexes : Bibliogr. 413 réf.

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  • Bibliothèque : Université de Bourgogne. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TDDIJON/1997/9
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque du Pôle API.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : BIO TH SED
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