Clonage du gène sam-1 d'Arabidopsis thaliana sous contrôle du promoteur inductible salt du riz : Expression et inactivation du transgène chez les lignées cellulaires de pavot

par Habib Elleuch

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Brigitte Thomasset.

Soutenue en 1997

à Compiègne .


  • Résumé

    La plante de pavot (Papaver somniferum) est connue pour la production d'alcaloïdes morphiniques (codéine et morphine). Les cultures de cellules indifférenciées ne produisent pas de tels alcaloïdes. Dans l'espoir d'induire la production de ces métabolites chez les suspensions cellulaires nous avons réalisé le clonage du gène sam1 d'Arabidopsis thaliana sous le contrôle du promoteur sa/T du riz, inductible par un stress osmotique ou par application d'ABA. Quatre constructions de vecteurs binaires ont été réalisées, différant entre elles par la séquence du promoteur régulant l'expression du gène sam1. L'utilisation du promoteur sa/T préserve le développement normal des cultures transgéniques. La transformation des suspensions cellulaires via Agrobacterium tumefaciens aboutit à l'obtention de lignées de cals résistants sur milieu de sélection dont l'état transgénique a été vérifié par PCR suivi d'une hybridation par une sonde spécifique du gène sam et/ou par Southern-blot sur l'ADN génomique. Le nombre de copies du transgène de certains transformants a été déterminé, il variait de 1 à 4. L'activité SAM-S a été mesurée. Les études statistiques ont confirmé que la majorité des cals surexpriment la SAM-S, cette surexpression pouvant atteindre 4 fois celle du témoin. Cette expression élevée du transgène, en l'absence d'ABA exogène a été confirmée par l'étude des transcrits. La présence d'ABA se traduit probablement par une inactivation post-transcriptionelle du transgène chez les transformants où la séquence sali est intacte. Une délétion du promoteur sali dans sa partie 5', juste au voisinage de l'ABRE se traduit par l'absence d'effet de I'ABA.

  • Titre traduit

    Cloning of the arabidopsis thaliana sam1 gene under the control of the salt inductible promoter of rice : Transgene expression and inactivation in papaver somniferum cell lines


  • Pas de résumé disponible.


  • Résumé

    Opium poppy (Papaver somniferum) plants are know for their production of morphinan alkaloids such as codeine and morphine. However, cell suspension cultures are unable to synthesize such metabolites. With the aim of mofifying secondary metabolism, gene transfer was performed using the sand gene from Arabidopsis thaliana under the control of the salT promoter. This promoter is inductible by osmotic stress or ABA. Four binary vectors were constructed differing from one another by the promoter sequence. One avantage of the use of an inductible promoter is that it is suposed to preserve the normal development of the cell cultures. Several putatively transformed cell lines were isolated on selective medium after co-cultivation with an Agrobacterium tumefaciens strain harboring one of the previously mentionned construct. The presence of the sam1 transgene was demontrated by PCR amplification followed by an hybridization of the amplification product with a specifie probe. The gene copy nomber was determined, varing from 1 to 4, for several transformed cell lines. Statistical analysis have confirmed that the majority of the transformed cell lines have a SAM-S activity higher than that of the untransformed cells (reaching 4 times), in absence of exogenous ABA. These data were confirmed by Northern-blots. Addition of ABA in the culture medium leads to post-transcriptionnal inactivation of the transgene, in cells transformed with the unchanged sequence of the Psalt. Deletion of the 515 bp in the 5' part of the promoter, near the ABRE, abolishes the effect of ABA.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 112 p.
  • Annexes : 159 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1997 ELL 1054
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.