Analyse des mecanismes d'activation transcriptionnelle par les androgenes d'un gene exprime dans le canal deferent de souris : recherche d'elements cis-regulateurs, influence des esters de phorbol

par Christian Darné

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de GEORGES VEYSSIERE.

Soutenue en 1997

à Clermont Ferrand 2 .

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  • Résumé

    L'epithelium du canal deferent de souris synthetise et secrete une proteine majoritaire de 34,5 kda, nommee mvdp (mouse vas deferens protein), dont l'expression est regulee par les androgenes a un niveau transcriptionnel. Dans les cellules de tumeur mammaire t47d, un element de reponse aux androgenes avait ete identifie en position - 111 pb et nomme arep. Afin de rechercher des domaines ou des elements regulateurs dans les 1800 pb qui precedent le site d'initiation, des constructions chimeriques associant le gene rapporteur cat (chloramphenicol acetyl transferase) ont ete transfectees dans les cellules t47d, cv1, et les cellules epitheliales de canal deferent de souris. Cette approche confirme que le segment le plus proximal (-121/+41 pb) est suffisant pour conferer une expression regulee par les androgenes dans les cellules t47d et cv1 et que l'arep est necessaire a l'induction hormonale. Un second are, plus distal (ared), ne parait pas implique, bien qu'il fixe le recepteur des androgenes avec une affinite superieure a celle de l'arep. Cet ared active moins efficacement un promoteur heterologue (tk) en reponse aux androgenes et il ne permet pas aux glucocorticoides et a la progesterone d'induire la transcription. La transfection des fragments genomiques montre aussi l'importance de la region -510/-121 dans la transcription du gene et de la region -795/-510 dans l'amplitude de la reponse aux androgenes. Toutefois, l'influence de ces regions differe selon le type cellulaire et il conviendrait de l'etudier dans les cellules homologues. Bien que ces cellules permettent de faire exprimer de facon regulee une construction mmtv-cat, les resultats obtenus avec les segments genomiques mvdp sont trop faibles pour etre analyses. Ils montrent toutefois une influence des regions distales sur l'activite promotrice. Outre l'arep, le segment -121/+41 contient deux autres elements : nf1 et sp1 qui fixent des proteines nucleaires et dont la mutation montre qu'ils sont impliques dans la reponse androgenique. La sequence sp1 intervient aussi dans la transcription basale du gene. Par ailleurs, les esters de phorbol stimulent l'expression du promoteur independamment de la presence de sequence ap1. Nos resultats montrent que la sequence arep et dans une moindre mesure la sequence nf1, sont impliquees dans cette reponse aux esters de phorbol. Cet effet du tpa peut etre reproduit en sur-exprimant le proto-oncogene c-jun lorsque les constructions sont stimulees par les androgenes, indiquant que l'effet du tpa passe par la presence du recepteur des androgenes et la mobilisation de c-jun.


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  • Détails : 160 P.
  • Annexes : 244 REF.

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  • Bibliothèque : Bibliothèque Clermont Université (Aubière). Section Sciences et Techniques.
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