Étude de la flagelline de Clostridium tyrobutyricum ATCC 25755 : analyse biochimique et séquencage de la partie codante du gène

par Françoise Arnold

Thèse de doctorat en Microbiologie fondamentale et appliquée

Sous la direction de Roger Malcoste.

Soutenue en 1997

à Brest .


  • Résumé

    Clostridium tyrobutyricum, bactérie anaérobie, contamine le lait sous forme sporale. Elle est responsable du défaut butyrique des fromages à pâte pressée cuite ce qui entraîne des pertes économiques importantes dans l'industrie fromagère d'où l'intérêt de sa détection. Un anticorps monoclonal (21e7-b12) produit au laboratoire reconnaît cette bactérie. Afin d'améliorer le protocole d'immunisation par l'utilisation d'antigènes définis, cette étude comporte deux étapes. Dans un premier temps, la caractérisation de l'antigène, reconnue par l'anticorps 21e7-b12 a permis de définir la flagelline, protéine constitutive du filament flagellaire comme étant le porteur de l'épitope. Cet épitope situé à la surface des filaments flagellaires est de nature glucidique. L’analyse biochimique de la flagelline montre une masse moléculaire apparente de 46 kda et un point isoélectrique apparent acide. Sa composition partielle en acides aminés présente un fort pourcentage en sérine et thréonine ce qui suggère la présence de liaisons o-glycosidiques. Les 23 premiers acides amines de la flagelline et les 13 acides aminés d'un peptide tryptique interne ont été déterminés par séquençage n-terminal. Cette protéine nous est apparue intéressante du fait de sa structure en acides aminés qui montre une variabilité pouvant être mise à profit pour détecter spécifiquement une espèce ou un genre bactérien. Dans ce but, des réactions d'amplification de la partie codante du gène de la flagelline ont été effectuées dans un second temps. Le clonage et le séquençage des produits amplifiés ont permis l'obtention des 377 acides aminés de la partie codante. La comparaison de la séquence de la flagelline de C. Tyrobutyricum avec celles des flagellines connues permet de déduire des séquences spécifiques de C. Tyrobutyricum qui serviront à la production d'anticorps monoclonaux. Ce modèle peut être élargi à d'autres espèces bactériennes flagellées.

  • Titre traduit

    Clostridium tyrobutyricum ATCC 25755 flagellin study : biochemical analysis and sequencing of the coding part of the gene


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Informations

  • Détails : 1 vol. (161 f.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 141-159

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  • Bibliothèque : Université de Bretagne Occidentale. Service commun de la documentation Section Droit-Sciences-STAPS.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TBRE97/17
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