Analyses d'images de multifluorescence en microscopie confocale

par Denis Demandolx

Thèse de doctorat en Sciences et technologies de l'information

Sous la direction de JEAN DAVOUST.

Soutenue en 1997

à Aix-Marseille 3 .


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  • Résumé

    La capacite des microscopes confocaux a realiser des coupes optiques a largement ete utilisee ces dix dernieres annees pour resoudre la structure tridimensionnelle des specimens biologiques. Comme pour la cytometrie en flux, les instruments actuels sont capables de distinguer differentes longueurs d'ondes et peuvent imager plusieurs marqueurs fluorescents revelant la distribution de multiples proteines ou acides nucleiques. La detection conjointe de plusieurs sondes fluorescentes a des applications importantes telle que la quantification des structures mono-marquees ou colocalisees sur sections tissulaires ou intracellulaires. Nous avons developpe et applique ici des procedures permettant une analyse precise de donnees confocales complexes multidimensionnelles. Nous avons cree en premier lieu les fluorogrammes de pixels afin de representer la distribution conjointe des pixels entre plusieurs canaux de fluorescence. Ces fluorogrammes representent un moyen efficace pour controler la qualite des images. Pour identifier les veritables colocalisations de fluorescence, nous avons ensuite developpe une nouvelle approche basee sur les cartes de correlation d'images. Ces cartes permettent de distinguer sur une base locale, les distributions de fluorescence coincidentes des superpositions non correlees. Nous avons finalement etendu cette approche a l'analyse statistique des objets d'interet identifies sur les micrographies. Ces objets sont examines grace a un ensemble d'attributs estimant taille, quantite de fluorescence et niveau de colocalisation entre les distributions de fluorescence. Ces donnees sauvegardees sur des fichiers au format standard de cytometrie en flux, permettent la classification d'objets et le denombrement de sous-populations. Cette cytometrie multiparametree sur images numeriques a ete appliquee avec succes pour comparer la frequence de structures mono- et multi-marquees dans plusieurs echantillons.

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  • Détails : 128 f

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  • Bibliothèque : Université d'Aix-Marseille (Marseille. Saint-Jérôme). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
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  • Cote : T 2489/A-B
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