Purification, caractérisation et relation structure-fonction de l'acylase I de l'entérocyte de porc

par Thierry Giardina

Thèse de doctorat en Biochimie

Sous la direction de Antoine Puigserver.

Soutenue en 1997

à Aix-Marseille 3 .


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  • Résumé

    L'acylation du groupement amine n-terminal est une modification frequemment rencontree dans les proteines des cellules eucaryotes et dans un bon nombre de proteines alimentaires. L'acylase i joue un role important dans la degradation terminale des proteines acylees puisqu'elle catalyse la reaction suivante : -n-acylaminoacide neutre ou hydrophobe + h#2oacide + aminoacide. Nous avons purifie a l'homogeneite une acylase a partir de muqueuse intestinale de porcs adultes avec un facteur de purification superieur a 10 000. L'enzyme est un dimere de 90 kda constituee de deux sous-unites apparemment identiques de 45 kda. Son extremite n-terminale est bloquee et sa composition en acides amines comparable a celle de l'enzyme de rein du meme animal. Son activite est maximale a un ph de 8 et a une temperature de 40c ; l'energie d'inactivation par la chaleur etant de 260 kj. Mol#-#1. Les parametres cinetiques de l'hydrolyse de la furylacryloyl-l-methionine ont ete determines : la valeur du km etant de 0,2217,8. S#-#1. La l-methionine, produit de la reaction, se comporte comme un inhibiteur competitif. La specificite de substrats vis a vis des acides amines neutres et hydrophobes confirme que nous avons bien purifie une acylase de type i. L'etude du site actif de cette enzyme intestinale, permet de conclure qu'il s'agit d'une metalloprotease dans laquelle un groupement thiol est implique dans la catayse. Nous avons egalement pu mettre en evidence que, dans certaines conditions, l'acylase i est capable de catalyser la synthese de derives acyles de la l-methionine en milieu aqueux. Cette enzyme est repartie de maniere equivalente le long du tractus digestif chez le porc. Sa localisation subcellulaire a egalement ete entreprise au niveau de l'enterocyte, et montre qu'il s'agit d'une enzyme exclusivement soluble.

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Informations

  • Détails : 129 p.

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  • Bibliothèque : Université d'Aix-Marseille (Marseille. Saint-Jérôme). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : T 2472/A-B
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