Application des microscopies à champ proche (AFM et STM) à l'étude structurale de protéines de la superfamille des immunoglobulines et de domaines membranaires

par Jean Thimonier

Thèse de doctorat en Immunologie

Sous la direction de José Rocca-Serra.

Soutenue en 1997

à Aix-Marseille 2 , en partenariat avec Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (autre partenaire) .

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  • Résumé

    Les microscopies a champ proche, qui regroupent principalement la microscopie par effet tunnel (stm) et la microscopie de forces atomiques (afm), sont des techniques qui permettent de visualiser l'enveloppe externe des systemes explores avec une resolution moleculaire voire atomique dans certains cas. Ces methodes d'imagerie sont donc potentiellement des outils de choix en biologie pour l'etude de la structure de proteines mais aussi pour l'analyse tridimensionnelle de complexes multimoleculaires a la surface de membranes cellulaires. La mise en uvre de microscopes a champ proche prototypes (afm et stm) au laboratoire a demande une phase d'apprentissage realisee par l'observation de billes d'or colloidal et de particules de latex, objets de dimensions et de morphologies bien definies. Les images obtenues i) attestent des bons etalonnages lateraux et verticaux des microscopes, ii) soulevent le probleme de la convolution entre la sonde et l'echantillon et iii) mettent clairement en evidence la necessite de travailler avec des courants tunnels (dans le cas du stm) et des forces d'appui (dans le cas de l'afm) les plus faibles possibles pour minimiser les interactions entre la pointe et le specimen. L'observation en microscopies par effet tunnel et de forces atomiques de proteines appartenant a la superfamille des immunoglobulines (anticorps, thy-1 et cd4) montre que ces techniques sont capables de visualiser les formes generales mais aussi les domaines constitutifs de ces molecules et leur geometrie relative. Enfin, la microscopie de forces atomiques, associee a la microscopie electronique a transmission a permis i) de caracteriser morphologiquement des microdomaines membranaires prepares a partir de thymocytes de souris, ii) d'analyser par des experiences d'immunomarquage indirect a l'or colloidal la distribution de l'antigene thy-1 a la surface de ces structures mais aussi directement sur des thymocytes et iii) de mettre en evidence la colocalisation de thy-1 et du glycosphingolipide gm1 sur des fragments membranaires.

  • Titre traduit

    Application of near-field microscopies (AFM AND STM) to the structural study of proteins of the immunoglobulin superfamily and of membrane domains


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Informations

  • Détails : 1 vol. (192 f.)
  • Annexes : Bibliogr. : f.178-192

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  • Bibliothèque : Université Aix-Marseille (Marseille. Luminy). Service commun de la documentation. Bibliothèque de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 28245
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