Chimiluminescence des esters d'acridinium : application à l'immunoanalyse et approche théorique

par Nathalie Marchesi

Thèse de doctorat en Sciences

Sous la direction de Jean-Pierre Aycard.

Soutenue en 1997

à Aix Marseille 1 .


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  • Résumé

    Parmi les differents composes chimiluminescents que nous avons synthetises, les derives acridiniques a fonction ester phenoxy ont montre un excellent rendement de chimiluminescence. La methylation de l'azote heterocyclique a conduit a une cinetique d'emission lumineuse rapide qui rend ces composes bien adaptes a une utilisation en immunoanalyse. Dans le cadre de ces applications, la plupart d'entre eux ont ete couples a des anticorps par une fonction terminale reactive afin d'en realiser le dosage. Differents protocoles ont ete mis en place afin d'obtenir une methode de marquage permettant la fixation d'un grand nombre de molecules d'esters d'acridinium tout en conservant l'immunoreactivite de l'anticorps. Les methodes de couplage directes des esters d'acridinium sur l'anticorps ont permis l'obtention de traceurs avec une tres bonne activite specifique. Cependant, une methode basee sur un couplage prealable de molecules d'esters d'acridinium sur une proteine (bsa) qui est ensuite couplee a l'anticorps, a donne de meilleurs resultats. Cette approche, bien que plus complexe, presente l'avantage de pouvoir augmenter l'activite specifique du traceur en substituant fortement la bsa sans affecter l'immunoreactivite de l'anticorps. La derniere partie de ce travail a ete consacree a l'etude theorique par la methode am1 de la chimiluminescence de differents esters phenoxyacridiniques. Les resultats obtenus ont montre une similitude des valeurs des barrieres d'activation pour les differentes etapes de la reaction. L'etude de la reaction de rupture de la dioxetanone, etape cle de la luminescence, a ete effectuee dans les etats electroniques s#0 et s#1. Bien que qualitatifs, les resultats originaux obtenus nous ont permis d'une part de localiser les croisements d'etats et d'autre part d'obtenir des valeurs approchees des termes de couplage qui regissent le phenomene de chimiluminescence.

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  • Détails : v, 142 p.
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