Utilisation du represseur lexa pour l'identification de mutants de la proteine c-fos capables d'homodimeriser

par Dominique Porte

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de M. SCHNAN.

Soutenue en 1996

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    La fixation sur l'adn et la dimerisation sont deux mecanismes essentiels a l'activite transcriptionnelle d'un facteur de transcription dimerique. Lexa est le represseur du systeme sos chez e. Coli. Des mutations ponctuelles dans le domaine n-terminal de liaison a l'adn, rendent lexa deficient dans la fixation de l'adn et dans son activite de represseur. Des mutations de reversion intrageniques restaurant l'activite represseur ont ete localisees dans le domaine n-terminal. Ces mutations de reversion ont ete isolees et introduites dans la sequence sauvage de lexa et conferent aux variants de lexa une activite represseur generalement superieure a celle de lexa sauvage. Le mutant de lexa portant la reversion ek71 isolee a ete purifie pour une etude in vitro de ses proprietes de liaison a l'adn. Les affinites pour une sequence d'adn non specifique et une sequence specifique sont augmentees pour ce mutant. C-fos est un composant du facteur ap1. C-fos ne peut lier l'adn qu'en formant un heterodimere avec c-jun grace a un motif leucine zipper. Fos ne peut pas homodimeriser car la proteine possede dans son interface de dimerisation, en plus de residus polaires, des residus charges qui exercent entre eux des repulsions electrostatiques. Dans une construction hybride contenant le domaine de liaison a l'adn de lexa fusionne au leucine zipper de c-fos, lorsqu'on remplace les residus des positions a du leucine zipper par des residus hydrophobes, i,l,v,m,f, c-fos est alors capable d'homodimeriser. En outre la substitution d'un seul residu a par i permet a c-fos d'homodimeriser. Certaines mutations parmi les plus interessantes ont ete introduites dans la proteine c-fos entiere. Ces mutants de c-fos capable de former des homodimeres ne possedent qu'une faible activite transactivatrice

  • Titre traduit

    The use of lexa repressor fusions for the identification of c-fos mutants able to homodimerize


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Informations

  • Détails : 166 P.
  • Annexes : 219 REF.

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