Etude du role de residus conserves dans la fonction de deux proteines, la papaine et le fragment fab d'un anticorps

par JEAN CHATELLIER et T. VERNET

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Danièle Altschuh.

Soutenue en 1996

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Quels roles jouent les residus conserves dans l'activite des proteines ? pour tenter de repondre a cette question, nous avons etudie par mutagenese dirigee le role de residus conserves de deux proteines modeles. L'asn175 est conservee dans les proteases a cysteine et jouerait un role dans le mecanisme catalytique de la papaine. En remplacant l'asn175 au hasard par l'un des 19 autres residus, nous avons identifie 13 residus incompatibles avec une activite detectable de la papaine exprimee dans s. Cerevisiae. L'activite specifique des mutants asn175gln et asn175ala pour l'hydrolyse d'un substrat synthetique est 3,4 et 151 fois plus faible que celle de l'enzyme sauvage, respectivement. L'asn175 n'est pas un residu essentiel pour l'activite catalytique de la papaine, dont le site actif est donc compose d'une diade essentielle cys25-his159. L'asn175 est impliquee dans la stabilite et dans le repliement de la papaine. Les residus conserves a l'interface vl-vh des anticorps joueraient un role dans la fonction du paratope en determinant la geometrie de l'association de vl avec vh. Le fab derive de l'anticorps monoclonal 57p, qui reconnait la proteine capsidaire du virus de la mosaique du tabac ainsi qu'un peptide synthetique correspondant a la region 134-151 de cette proteine, a ete clone et exprime dans e. Coli. Treize residus conserves a l'interface vl-vh du fab 57p ont ete remplaces de facon systematique et combinatoire par alanine grace a une strategie originale de mutagenese. Les parametres cinetiques de 19 mutants simples ou multiples pour le peptide sauvage et 4 variants peptidiques ont ete determines par biacore#t#m. La modification des contacts entre vl et vh n'abolit pas l'association des domaines et les proprietes cinetiques des mutants sont modifiees dans tous les cas. Les residus conserves et eloignes du site de liaison avec l'antigene influencent le fonctionnement de ce site

  • Titre traduit

    Study of the role of conserved residues in the function of two proteins, the papain and the fab fragment of an antibody


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Informations

  • Détails : 234 P.
  • Annexes : 373 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1996;2326
  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Danièle Huet-Weiller.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : H 503.000,1996
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