Optimisation de la cryoconservation d'apex de solanum phureja par enrobage-deshydratation, en presence de saccharose. Etude sur l'effet de differentes substances cryoprotectrices

par SAMIA BISSATI BOUAFIA

Thèse de doctorat en Biologie

Sous la direction de J.-C. GLOAGUEN.

Soutenue en 1996

à Rennes 1 .


  • Résumé

    Le protocole de cryoconservation d'apex de solanum cultivees in vitro, par enrobage-deshydratation a ete optimise. Il comporte l'encapsulation des apex dans des billes d'alginate, une preculture dans une solution contenant 0,75m de saccharose, une deshydratation (4h30) sur silicagel reduisant a 0,27g. G#-#1 de matiere seche la teneur en eau, et l'immersion directe des echantillons dans l'azote liquide. Apres conservation, les apex enrobes, rechauffes a temperature ambiante, sont remis en culture sur un milieu enrichi en substances de croissance. Par cette methode, 78% des apex cryoconserves, developpent des plantules, sans callogenese intermediaire. La tolerance a la dnshydratation et a la congelation est influencee par l'etat physiologique et l'origine des apex. La survie et la reprise diminuent pour les apex provenant de vitroplants ages de 6 a 8 semaines. La tolerance a la cryoconservation est amelioree quand les apex sont preleves sur des boutures mononodales reactivees pendant 14 jours, les axillaires etant les plus tolerants a la congelation. Ce procede a ete applique avec succes a differents cultivars des especes s. Tuberosum et s. Phureja, les taux de reprise variant entre 50 et 78%. L'etude de conformite du materiel cryoconserve, remis en culture sous serre, montre que la congelation ne modifie ni la floraison, ni la tuberisation. L'utilisation d'autres cryoprotecteurs (monosaccharides, disaccharides et polyols) a revele que le saccharose n'est pas le plus efficace. Maltose et trehalose assurent une meilleure cryoprotection (88% et 91% de reprise, respectivement). Les taux de reprise en presence de polyols sont bas et aucune survie n'a ete enregistree apres congelation des apex precultives en presence de monosaccharides. Les analyses glucidiques des apex precultives en presence de saccharose, trehalose ou glucose, denotent une augmentation des sucres solubles totaux, en particulier du saccharose. L'etude en microcalorimetrie differentielle a balayage sur les changements d'etat de l'eau montre que la preculture permet une transition vitreuse, dans l'enrobage et les apex, apres l'etape de deshydration. En presence de disaccharides la survie des apex, apres congelation, est en rapport avec l'existence d'une transition vitreuse reversible. Par contre, avec le glucose, ni l'etat vitreux, ni une teneur importante en saccharose n'assurent une survie a la congelation. Le mode d'action des differents cryoprotecteurs est discute


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Informations

  • Détails : 108 P.
  • Annexes : 280 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Rennes I. Service commun de la documentation. Section sciences et philosophie.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TA RENNES 1996/145
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