La squalène synthase d'Arabidopsis thaliana - caractérisation moléculaire et expression chez la levure Saccharomyces cerevisiae

par Rachida Kribii

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire et moléculaire

Sous la direction de F. KARST.

Soutenue en 1996

à Poitiers .


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  • Résumé

    La squalene synthase (sqs) est l'enzyme qui catalyse la premiere etape specifique de la voie de biosynthese des sterols en condensant deux molecules de farnesyl diphosphate en une molecule de squalene. Nous avons isole un adnc codant la sqs de la plante arabidopsis thaliana. L'adnc presente un cadre ouvert de lecture codant potentiellement une proteine de 410 acides amines qui presente des similarites significatives avec les sqs de levures et de mammiferes. Cet adnc a ete exprime, sous controle d'un promoteur fort de levure, dans une souche de saccharomyces cerevisiae depourvue de l'activite sqs et auxotrophe pour l'ergosterol. L'etude a revele que l'adnc, codant la qsq vegetale, ne permet pas la complementation de la mutation de la souche de levure. Nous avons pu observer, en revanche, que cet adnc conduit a la production d'une sqs fonctionnelle et dont l'activite est localisee au niveau des microsomes. Nous avons demontre que le squalene forme par l'action de l'enzyme vegetale, n'est cependant pas utilise comme substrat de la squalene epoxydase de levure, et explique ainsi l'absence de complementation. Un adnc codant une proteine chimerique, dont la region c-terminale de l'enzyme de plante a ete remplacee par la sequence correspondante chez la levure, permet a la levure deletee au niveau du gene de la sqs, d'acquerir une prototrophie vis a vis de l'ergosterol, suggerant ainsi que cette region de l'enzyme de levure est necessaire pour l'acheminement du squalene dans la voie de biosynthese de l'ergosterol. D'autre part, l'analyse du genome d'arabidopsis thaliana, par la technique de southern, revele la presence, chez cette plante, de deux genes codant la sqs organises en tandem. Le gene de sqs, correspondant a l'adnc que nous avons clone, est exprime dans les differents organes de la plante et principalement dans les racines

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  • Détails : 160 f
  • Annexes : 227 réf. bibliogr

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  • Cote : TS 96/POIT/2390
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