Etude par chromatographie d'affinité liquide haute performance des interactions entre des protéines de la coagulation et des polysaccharides sulfatés à activité anticoagulante immobilisés sur des supports de silice enrobée

par Eric Legendre

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Claude Capperonnier.

Soutenue en 1996

à Paris 13 .


  • Résumé

    Les fucanes, polysaccharides sulfates extraits d'algues brunes marines, présentent une activité anticoagulante. IIs agissent en favorisant l'inhibition de la thrombine, enzyme responsable de la formation du caillot. Ce processus nécessite la formation d'un complexe ternaire entre le fucane, la thrombine et l'un des deux principaux inhibiteurs plasmatiques de la thrombine: l'antithrombine ou le deuxième cofacteur de l'héparine. Cependant, les mécanismes précis qui conduisent à cette association sont encore mal connus. Nous avons étudié les interactions entre trois polysaccharides à activité anticoagulante (un fucane de faible masse molaire extrait d'ascophyllum nodosum, un fucoidane commercial extrait de fucus vesiculosus et une heparine) et deux protèines de la coagulation (thrombine et antithrombine) au moyen de la technique de chromatographie d'affinité liquide haute performance. La réalisation des supports chromatographiques s'est dérouleée en trois temps: passivation de billes de silice par adsorption de dextrane substitué en groupements diethylaminoethyles, puis activation du dextrane par un agent de couplage (bdge ou epichlorhydrine), et immobilisation des polysaccharides étudiés sur le support. La thrombine et l'antithrombine ont ensuite étè injectées sur les supports synthetisés et leur comportement chromatographique étudié (capacité d'adsorption des supports, force ionique à laquelle les protéines sont desorbées). Une étude plus approfondie a étè menée sur un support fonctionnalise par le fucane afin de préciser la nature des interactions développées entre ce polysaccharide et l'antithrombine. Les résultats obtenus en faisant varier les conditions de PH et de débit de la phase mobile, ainsi que la durée du gradient salin utilisé pour la desorption semblent indiquer que la dissociation du complexe fucane-antithrombine n'est pas seulement liée aà la force ionique du solvant mais comporte aussi une étape a cinétique lente pouvant vraisemblablement etre attribuée a un changement de conformation


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Informations

  • Détails : 1 vol. (139 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 111

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  • Bibliothèque : Université Paris 13 (Villetaneuse, Seine-Saint-Denis). Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH 1996 065
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